一种生产西洋参皂甙的悬浮培养方法

摘要

本发明公开了一种生产西洋参皂甙的悬浮培养方法，并具体公开了西洋参根尖愈伤组织诱导培养、继代培养和悬浮培养相关因素及组合配比；与现有技术相比，本发明所述的方法避免了因培养条件的改变导致皂甙含量的变化，使其能够稳定生产人参皂甙；同时，本发明操作简单、容易控制、方法可靠，通过对培养条件的控制，还能够实现总皂甙与单体皂甙的定向培育，为西洋参皂甙的工业化生产提供了理论依据和技术指导，对资源深度开发利用具有深远的意义。

主权项

一种生产西洋参皂甙的悬浮培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下，取西洋参根尖组织，将其形态学上的下端接种至诱导培养基上，然后置于暗箱中进行愈伤组织诱导培养，获得致密型愈伤组织，所述诱导培养基的配方为：在MS基础培养基中加入1.5～2.5mg/L的2，4‑D和0.5～1.0mg/L的6‑BA，灭菌前调节pH至4.5～5.8；(2)将步骤(1)的致密型愈伤组织转移至继代培养基中，然后置于暗箱中进行继代培养，获得疏松型愈伤组织，所述继代培养基的配方为：在MS基础培养基中加入1.5～2.5mg/L的2，4‑D和0.5～1.0mg/L的6‑BA，调节蔗糖浓度为20～30g/L，灭菌前调节pH至4.5～5.8；(3)将步骤(2)的疏松型愈伤组织转移至悬浮培养基中，置于自然光照下振荡悬浮培养，获得悬浮细胞，所述悬浮培养基的配方为：在MS基础培养基中加入0.8～1.0mg/L的2，4‑D、0.1mg/L的激动素KT、0.3～0.5mg/L的6‑BA、0.3～0.5mg/L的NAA、调节蔗糖浓度为20～30g/L，灭菌前调节pH至4.5～5.8；(4)调节步骤(3)的悬浮培养基的激素配方，将步骤(3)的悬浮细胞进行进一步的定向培养，其中：总皂甙定向培养的悬浮培养基的配方为：在MS基础培养基中加入0.7～1.2mg/L的2，4‑D、0.1～0.3mg/L的KT、0.5mg/L的6‑BA、0.4～0.8mg/L的NAA，调节蔗糖浓度为20～30g/L，获得富含总皂甙的悬浮细胞；单体皂甙Rg1定向培养的悬浮培养基的配方为：在MS基础培养基中加入0.5～1.0mg/L的2，4‑D、0.1mg/L的KT、0.5～1.0mg/L的6‑BA、0.5mg/L的NAA，调节蔗糖浓度为20～30g/L，获得富含单体皂甙Rg1的悬浮细胞；单体皂甙Rh1定向培养的悬浮培养基的配方为：在MS基础培养基中加入0.8～1.0mg/L的2,4‑D、0.1mg/L的KT、0.5～1.0mg/L的6‑BA、0.8～1.0mg/L的NAA，调节蔗糖浓度为20～30g/L，获得富含单体皂甙Rh1的悬浮细胞。