高效诱导多能干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法

摘要

本发明涉及一种高效诱导多能干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法，属于生物技术领域。本发明方法在不添加任何小分子诱导的情况下，在体外模拟体内眼球发育的过程，自发的分化为RPE细胞。与已经报道的方法相比，本发明未采用任何小分子诱导刺激，严格模拟体内眼球发育，简单，快捷，高效的获得大量的由多能干细胞分化而来的RPE细胞。

主权项

一种高效诱导多能干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将多能干细胞接种到饲养层细胞中，加入干细胞完全培养基，放置培养并定期换液至细胞达到融合状态；b、用酶处理多能干细胞成团块并接种到培养皿中，加入添加有200ug/ml Matrigel的第一诱导分化培养基培养两天，更换无Matrigel添加的第一诱导分化培养基继续培养5天；c、在分化第8天更换第二诱导分化培养基，放置培养并定期换液至细胞分化形成大量的色素细胞；d、用酶处理分化细胞成团块并悬浮培养，1天后进行挑选分离，收集黑色的细胞悬球；e、将黑色细胞悬球接种于培养皿中，加入第二诱导分化培养基，放置培养并定期换液便可得到成熟的视网膜色素上皮细胞。