一种简单低成本的碱性磷酸酶活性的检测方法

摘要

本发明公开了一种简单低成本的碱性磷酸酶活性的检测方法。利用样本溶液中的碱性磷酸酶分析物在催化焦磷酸水解反应后，Cu²⁺因未被焦磷酸络合而可高效率抑制糖化酶活性，使得水溶性较低的淀粉不被糖化酶水解。反应溶液中的淀粉被滴加到纸微流控分析装置中后使得相应纸体发生从亲水性转变为疏水性的润湿性改变，进而使检测试剂溶液可流过该区域的体积降低，最终导致其在纸装置中的流动长度较短。纸装置中检测试剂溶液的流动长度反比于样本中碱性磷酸酶的活性大小，即完成碱性磷酸酶活性的定量检测。本发明方法简单易行，未经专业培训的操作人员也能开展实验，且不使用任何仪器进行定量信号读取，极大降低分析成本，具有广阔的应用前景。

主权项

一种简单低成本的碱性磷酸酶活性的检测方法，其特征在于具体步骤为：步骤一，将碱性磷酸酶样本溶液与焦磷酸溶液混合，焦磷酸分子被碱性磷酸酶特异性水解为磷酸根离子，然后加入Cu²⁺溶液进行Cu²⁺‑焦磷酸络合反应，再加入糖化酶溶液进行Cu²⁺抑制糖化酶活性反应，随后加入可溶性淀粉溶液进行糖化酶催化水解淀粉反应，制得最终反应溶液；步骤二，将步骤一制得的最终反应溶液滴加到纸微流控分析装置的圆形反应溶液添加区，进而在纸微流控分析装置的圆形检测试剂添加区滴加彩色试剂溶液，该彩色试剂溶液将流经圆形反应溶液添加区进入长方形量测区；步骤三，当彩色试剂溶液在长方形量测区中停止流动后，测量其在长方形量测区中的流动长度，该长度的大小与碱性磷酸酶样本溶液中碱性磷酸酶活性的大小呈负相关，即完成碱性磷酸酶活性的定量检测；所述纸微流控分析装置由亲水性纸张制备，含有连续的并按照圆形检测试剂添加区、圆形反应溶液添加区和长方形量测区顺序排列的三部分功能区域；所述彩色试剂为水溶性彩色墨水、彩色染料和彩色色素中的一种；所述长方形量测区设置有长度标尺或者未设置长度标尺，当设置有长度标尺时，能够直接读取彩色试剂溶液在长方形量测区中的流动长度，当未设置长度标尺时，使用直尺量测彩色试剂溶液在长方形量测区中的流动长度。