用于肝癌体外诊断试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种用于肝癌体外诊断试剂盒，包括捕获抗体，所述捕获抗体是脯氨酸肽酶（PLD）制得的单克隆抗体；所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体为脯氨酸肽酶制得的多克隆抗体。本发明的有益效果如下：具有灵敏度高准确性强的特点，其灵敏度及准确性均达到70%以上。

主权项

一种用于肝癌体外诊断试剂盒，包括捕获抗体，其特征在于：所述捕获抗体是脯氨酸肽酶制得的单克隆抗体，所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体为脯氨酸肽酶制得的多克隆抗体；其制备方法包括如下步骤：（1） 抗原的制备：将脯氨酸肽酶的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原，其中，所述抗原作为标准品用；（2）捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的单克隆抗体，所述单克隆抗体作为本试剂盒的捕获抗体；（3）检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物得到相应的多克隆抗体，所述多克隆抗体作为本试剂盒的检测抗体；（4）捕获抗体包被：①.用碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液将浓度为 1μg/ml 的捕获抗体包被 微量滴定板的孔；②. 封盖微量滴定板并在 4℃ 下孵育过夜；③.弃去包被液，并用洗涤液洗涤微量滴定板两次，每次在微孔中加入 200 μl PBST，在水槽上方轻轻甩动微量滴定板，除去洗涤液，在纸巾上轻拍微量滴定板，除去剩余的液滴，晾干放于4℃环境中备用；（5）封闭和加样：每孔添加 200μl 封闭缓冲液，封闭包被孔中剩余的蛋白质结合位点。