一种南美油藤愈伤组织诱导，分化和植株再生的方法

摘要

本发明涉及一种南美油藤的愈伤组织诱导，分化及植株再生的方法。南美油藤种子含有棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等多种不饱和脂肪酸，同时还含有多种维生素和丰富的蛋白质，是优质的保健食用油和化妆品原料。为了克服南美油藤规模化引种在种植中出现的较原产地存活期短，抗病性差，种质退化等现象，对南美油藤进行种质改良，提高抗病性及耐寒性，筛选及培育适应性强的南美油藤新品种刻不容缓。本发明以南美油藤种子为繁殖材料，利用植物组织培养技术，通过种子无菌萌发、愈伤组织诱导及分化，再生植株形成等过程，建立了一套植物脱分化，再分化的体系。本发明是现代生物技术育种必要的技术基础，对南美油藤的品种改良及优良品种繁育具有重要意义。

主权项

一种南美油藤愈伤组织诱导，分化和植株再生的方法，其特征在于：包括南美油藤种子的无菌萌发、初代培养及愈伤组织诱导与分化、不定芽的增殖培养、不定芽的继代培养、生根培养和驯化和移栽：第一步：南美油藤种子的无菌萌发：种子用常规方法消毒催芽，剥去外种皮；将上述剥去外种皮的种子用75％乙醇浸泡30s后置入0.1％升汞溶液消毒15min，无菌水冲洗5～6次，无菌滤纸吸干水分。将消毒处理后的种子，以胚为纵轴，切去两边胚乳，接入种子无菌萌发培养基中，26℃±1℃下散射光培养，光照强度500～1000Lx。培养30～35天后，种子萌发生长至3cm以上后，以无菌幼苗为外植体。第二步：初代培养及愈伤组织诱导与分化取无菌幼苗子叶为外植体，切段，接种于诱导与分化培养基中，26℃±1℃下培养，每天光照12小时，光照强度2000～2500Lx 20～25天后形成愈伤组织，继续培养40天左右分化出不定芽。第三步：不定芽的增殖培养将形成不定芽块转入转移至增殖培养基中，26℃±1℃下继代培养，光照强度2000～2500Lx培养，每天光照12小时，不定芽可增殖，培养周期40～45天。第四步：不定芽的继代培养新增殖的芽细小，叶片有些卷曲皱缩，将其转接入继代培养基中继续生长，使之叶片伸展，茎伸长，成为健壮无根小苗。培养温度26℃±1℃，光照强度2000～3000Lx，每天光照12小时。当小苗长至3～4cm时，进入生根培养。第五步：生根培养将生长正常的无根芽苗从基部切下接入生根培养基中，25±1℃培养，光照12h，光照强度2000～3000lx。培养20～30天后生根。第六步：驯化和移栽将生根苗培养瓶置于大棚中，自然光下培养二周后开盖驯化，一周后将小苗移出，洗净基部培养基，在多菌灵500倍液中浸泡15min，移入草炭土：珍珠岩：黄心土＝1：1：1的基质中种植，常规水肥管理。