磷酸替米考星的免疫胶体金检测卡及其制备方法

摘要

本发明磷酸替米考星的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及抗生素检测技木领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含磷酸替米考星单克隆抗体的玻璃纤维素膜。包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线。T线包被有磷酸替米考星蛋白质偶联物。C线包被有羊抗鼠抗体。本发明有效用于快速检测磷酸替米考星，方便、快捷、结果准确。

主权项

磷酸替米考星胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：   （1）胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶2个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸5 ml，制成500 ml 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠溶液5‑7ml，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2‑8℃保存备用   （2）抗体的预处理：将要标记的磷酸替米考星抗体在1000r/mi n，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成l mg/ml；或者0.01mol/L,PBS稀释成l mg/ml，过0.22um滤膜；   （3）胶体金标记物的制备：取步骤（1）中的胶体溶液40 mL，用0.25mol／LK₂C0_3, ，调节胶体金溶液PH至8.5，电磁搅拌器250 r／min搅拌；逐滴加入4ml含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液；反应10 min；逐滴加入4 mL l0％BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min离心20 min，弃上清，收集沉淀定，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成磷酸替米考星单克隆抗体胶体金标记物：   （4）胶体金膜的制备：将步骤（3）磷酸替米考星单克隆抗土胶体金标记物用划膜仪以5/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含磷酸替米考星单克隆抗土胶体金标记物的胶体金膜；   （5）包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体磷酸替米考星蛋白质偶联物稀释成1mg/mL,用划膜仪依次以1/cm的浓度喷涂在硝酸纤维膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；   （6）样品垫前处理；将样品垫前处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；   （7）检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫，胶体金膜，包被膜和吸水垫，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。