一种快速检测农作物中双甲脒含量的试剂盒

摘要

本发明提供了一种能检测果蔬中双甲脒的酶联免疫试剂盒，涉及免疫分析检测技术。该试剂盒包括：包被了双甲脒的酶标板；双甲脒抗体；双甲脒标准品；标准品稀释液；酶标二抗；底物显色液；洗涤缓冲液和终止液。本发明的关键技术在于制备了一种可以识别双甲脒的单克隆抗体。本发明的试剂盒采用此高特异性的双甲脒单克隆抗体，主要试剂以工作液形式提供，可以减少操作步骤，节省时间。

主权项

一种用于双甲脒快速检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于它包含下列成分：（1）包被了双甲脒抗原的酶标板（2）双甲脒抗体（3）双甲脒标准品（4）标准品稀释液（5）酶标二抗（6）底物显色液（7）洗涤缓冲液（8）终止液其中，本发明的试剂盒所用试剂的配制方法如下：（1）双甲脒标准溶液配制：准确称取标准双甲脒1 mg，精确到0.00001 g，配成1 μg/mL标准品溶液母液；使用时，用标准品稀释液稀释成所需的浓度（10‑1000 ng/mL）；（2）标准品稀释液为0.05 mol/L Tris‑HCl，pH 8.0，0.9%NaCl的缓冲液；（3）包被缓冲液为0.1 mol/L碳酸缓冲液，pH7.8，含0.05% NaN₃，0.9% NaCl；（4）封闭液为0.05 mol/L Tris‑HCl溶液，pH8.0，含0.5% BSA，0.9% NaCl，0.04% NaN₃；（5）洗涤缓冲液为0.05 mol/L Tris‑HCl，pH 8.0，0.9% NaCl，0.04% Tween20；（6）双甲脒单克隆抗体工作液：将抗体用pH7.4，0.02 mol/L，含1%卵清蛋白的磷酸盐缓冲液稀释成蛋白浓度为0.1‑1 μg/L使用；（7）酶标二抗工作液：辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗；（8）底物显色液A液：过氧化氢或过氧化脲；（9）底物显色液B液：邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB）；（10）底物显色液对硝基磷酸盐缓冲液：pH8.1，含有MgCl₂ 0.01% 100 mmol/L Tris‑HCl；（11）终止液：2 mol/L硫酸。