利用代谢工程消除阿卡波糖生产菌株产生组分C的方法

摘要

一种利用代谢工程消除阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.产生组分C的方法，是通过缺失阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.中编码麦芽寡聚糖基海藻糖合成酶(TreY)的treY(ACPL_6622)基因，消除该类菌株发酵过程中副产物组分C的积累。本发明所获得的工程菌株QQ‑2不积累组分C，同时阿卡波糖产量提高10.7％。

主权项

一种利用代谢工程消除阿卡波糖生产菌株中组分C的产生的方法，其特征在于：通过缺失阿卡波糖生产菌Actinoplanes spp.中编码麦芽寡聚糖基海藻糖合成酶的treY基因，消除该类菌株发酵过程中副产物组分C的积累；具体步骤如下：第一步：构建用于treY基因敲除的重组质粒pLQ756；第二步：将重组质粒pLQ756通过菌丝体接合转移的方式导入阿卡波糖生产菌株Actinoplanes spp.，获得接合子；第三步：获得的接合子经培养、松弛、涂布平板后，挑取单菌落，并验证是否为阿泊拉霉素敏感型；将具有阿泊拉霉素抗性的菌株培养后，抽提基因组，进行PCR验证，获得对treY缺失突变株QQ‑2；第四步：对treY缺失突变株QQ‑2进行发酵，对发酵液进行HPLC和LC‑MS分析。