一种石蜡切片样品转换成扫描电镜样品的方法

摘要

本发明提供了一种石蜡切片样品转换成扫描电镜样品的方法，所述方法选取动植物组织，经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、切割、脱蜡、喷金，制成适用于扫描电镜观察的样品。该方法能显著提高观察动植物显微结构的放大倍数，为研究动植物细胞显微结构提供支持。

主权项

一种石蜡切片样品转换成扫描电镜样品的方法，其特征是：（1）取材：清理动物或植物样品表面的杂质，切为不超过1cm³小块；（2）固定：将样品放入浓度70%的酒精或FAA固定液中，固定液超过样品体积10倍以上，时间超过24小时；（3）脱水：为了避免剧烈的扩散引起的组织的强烈收缩，脱水步骤应从低到高浓度梯度的酒精来进行，即70％、80％、95％至100％完全脱水；（4）透明：将组织块先经纯乙醇与二甲苯的等体积混合液，再进入纯二甲苯，透明时间在30min至2h，在纯二甲苯中应更换2次，总时间不超过3h；（5）浸蜡：透蜡在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石蜡熔点3℃，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理；纯石蜡应处理2～3次，透蜡的时间每次需15～30min；动物材料的石蜡熔点为52～56℃；植物材料的石蜡熔点为52～60℃；（6）包埋：将熔化的蜡倒入纸盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，再轻轻提起纸盒，平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出，即为包埋块；（7）切片：用加热的蜡铲或刀片将固着的包埋块四周修平，使上下两面修成平行面，保留组织周围附着宽2～3mm的石蜡，而修好的蜡块呈长方形；将所要切的包埋块固定在标本台上，使包埋块外切面与标本夹截面平行，并让包埋块稍露出一截；将刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋，上好刀片，使切片刀平面与组织切面间呈15°的夹角，包埋块上下边与刀口平行；右手转动转轮，左手持毛笔在刀口稍下端接住切好的片子，并托住切下的蜡带，待蜡带形成一定长度后，右手停止转动，持另一枝毛笔轻轻将蜡带挑起，平放于纸盒内；（8）粘片：将涂有粘片剂的载玻片上涂上水，把已分割好的切片贴上去，再置载玻片于35℃恒定的烫板上让切片摊干，并倾斜或用吸水纸吸去水分，最后将载玻片再度放烫板上晾干；（9）切割：用平口玻璃钳子将切片周围空白载玻片切割掉；（10）脱蜡：此步骤为透明的逆过程每级停留2～5min；（11）干燥：自然风干；（12）喷金：将干燥的样品用导电胶粘在金属样品台上，然后放在真空蒸发器中喷镀一层50 ‑ 300 Å厚的金属膜。