一种基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法，用纯化的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)，再与Alexa Fluor488标记的以及Alexa Fluor594标记的GFAP抗体结合，形成抗体‑抗原‑两个荧光标抗体复合物，利用FRET原理用荧光酶标仪测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)浓度。由于用到了三个抗体同时识别，特异性更高，准确性更好，并比现有方法检测时间大大缩短。为临床诊断提供了参考信息，有助于临床医生诊断和评估脑卒中进展情况，改善病人的预后。

主权项

一种基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采集待检测全血样品的血清；2)用纯化的神经胶质纤维酸性蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体；3)向包被抗体的微孔中加入神经胶质纤维酸性蛋白，然后再与Alexa Fluor488以及Alexa Fluor594标记的神经胶质纤维酸性蛋白抗体结合，形成抗体‑抗原‑两个荧光标记抗体复合物；4)利用荧光能量共振转移法，用酶标仪测定抗体‑抗原‑两个荧光标记抗体复合物的吸光度，然后通过标准曲线计算出待检测全血样品中GFAP的浓度。