三七总皂苷配伍葛根总黄酮在血瘀模型大鼠体内整体药代动力学评价方法

摘要

本发明属于组分药物分析技术领域。采用超高效液相色谱‑串联质谱(UPLC‑MS/MS)多反应监测(MRM)扫描模式，建立生物体内多组分的定量反应离子，以典型结构类型的代表组分作为“内参比物”，定量分析生物体内的中药原形组分与生物体内代谢产物的浓度，并以中药原形组分与代谢产物制备混合质控样品验证方法并监控分析过程。本发明建立的基于不加校正因子的内参比物多组分高通量分析技术，解决了多组分定量分析缺乏标准对照品的技术障碍，实现仅以少数组分的标准对照品即可对生物样品中可监测中药原形组分及其代谢产物进行多组分的整体定量。采用本技术对中药复方的已知与未知组分及代谢产物进行了多组分整体药代动力学评价。结果表明，本技术符合CFDA的相关技术要求。

主权项

三七总皂苷配伍葛根总黄酮在血瘀模型大鼠体内整体药代动力学评价方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)给药溶液的制备：取三七总皂苷与葛根总黄酮，用0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含三七总皂苷10mg与葛根总黄酮20mg的溶液；(2)药物代谢物溶液的制备：健康Wistar大鼠，按5mL/kg剂量给予葛根总黄酮溶液65.6mg/mL，于给药后2～4h采集尿液，离心，取上清液即得，上清液含葛根素1.66mg/mL、大豆苷0.130mg/mL；(3)生物样品中移行成分的结构分析：色谱柱：Capcell pak MG C₁₈色谱柱，3.0mm×7.5cm，3.0μm；柱温：35℃；流动相A为2mM醋酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，流速0.75mL/min，分流比2:3；电喷雾离子源ESI；正离子模式下的SIM与MRM检测；血浆样品400μL，加0.1％甲酸乙腈溶液800μL，涡旋混合2min，于4℃下15000r/min离心15min，分离上清液，于35℃下氮气流吹干，残渣加入1:1的甲醇‑水100μL复溶，并于4℃下15000r/min离心15min，取上清液10μL进样分析；(4)生物样品中指标成分的定量分析：生物样品的预处理血浆样品500μL，加1:4的甲醇‑水100μL、内标溶液50μL，涡旋混合1min，加10％VC溶液10μL与0.1％甲酸乙腈溶液1000μL，涡旋混合2min，于4℃下15000r/min离心15min，分离上清液，于35℃下氮气流吹干，残渣加1:4的甲醇‑水100μL，超声溶解1min，涡旋混合2min，于4℃下15000r/min离心15min，取上清液10μL进样分析；色谱/质谱条件色谱柱：Capcell pak MG C₁₈色谱柱，3.0mm×7.5cm，3.0μm；柱温：35℃；流动相A为2mM醋酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，流速0.75mL/min，分流比2:3；电喷雾离子源ESI；采用正离子模式下的MRM检测；(5)药代动力学评价雄性Wistar大鼠，随机分为1.0～6.0h共9个时间组，于急性血瘀模型造模18h后给予27mg/kg三七总皂苷配伍54mg/kg葛根总黄酮，按各组所示时间点取血，制备血浆，于‑80℃冷冻备用；取血浆样品，对血浆中44个移行成分进行同步高通量分析。