大量分泌的蛋白的筛选和它们作为融合配偶体在重组蛋白制备中应用

摘要

本发明涉及鉴定用于超量分泌制备重组蛋白质的合适的分泌融合配偶体(SFP)的方法。SFP可通过分泌蛋白质组分析获得。重组蛋白可与分泌融合配偶体(SFP)一起以融合蛋白形式制备得到，并通过体外蛋白酶处理与SFP相分离。本发明的SFP极大地提高了目标蛋白和肽的分泌水平，所述目标蛋白和肽对于生物制药和生物产业很有价值。

主权项

一种重组产生毒蜥外泌肽‑4的方法，包括：a)制备表达载体，所述表达载体包含：(i)编码所述毒蜥外泌肽‑4的多核苷酸，其连接至(ii)编码来自分离自酵母的分泌蛋白质组的分泌融合配偶体(SFP)的多核苷酸；b)用所述表达载体转化宿主细胞；c)在从所述宿主细胞中产生并分泌出可操作地连接至所述SFP的毒蜥外泌肽‑4的条件下，培养所述宿主细胞；以及d)将所述SFP与所述毒蜥外泌肽‑4分离，其中所述分泌融合配偶体选自SEQ ID NO:81所示的GAS3、SEQ ID NO:82所示的GAS5、SEQ ID NO:83所示的PST1、SEQ ID NO:84所示的SCW4、SEQ ID NO:88所示的YGP1、SEQ ID NO:89所示的YPS1及SCW4的片段，其中所述SCW4的片段选自为SEQ ID NO:84的1‑84位氨基酸的SCW4‑1、为SEQ ID NO:84的1‑101位氨基酸的SCW4‑2、为SEQ ID NO:84的1‑135位氨基酸的SCW4‑3和为SEQ ID NO:84的1‑169位氨基酸的SCW4‑4。