一种高产N‑乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌的构建及应用方法

摘要

一种高产N‑乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌的构建及应用方法，属于遗传工程技术领域。本发明是通过对大肠杆菌中已有的代谢途径进行修饰和改造，阻断N‑乙酰氨基葡萄糖及其副产物分解和向胞内转运途径，同时引入外源的氨基葡萄糖乙酰化酶基因，在宿主内形成从葡萄糖到N‑乙酰氨基葡萄糖的完整合成途径，构建的工程菌株能利用葡萄糖或甘油为底物，通过好气发酵培养合成N‑乙酰氨基葡萄糖，以实现工业化生产。

主权项

一种高产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌工程菌BL21（DE3）/ΔnagABE /ΔmanXYZ/pACYCDuet‑glmS‑glmA‑02，该工程菌宿主菌为BL21（DE3），工程菌中nagABE和manXYZ基因被敲除，glmS和glmA克隆到同一表达载体pACYCDuet‑1上；氨基葡萄糖乙酰化酶的基因glmA根据GenBank No. AE001437.1 中的CA_C0184 基因序列全基因合成；6‑ 磷酸氨基葡萄糖合成酶的基因glmS根据GenBank No.NC_007779 的大肠杆菌W3110 基因组序列经全基因合成得到，或利用大肠杆菌W3110基因组DNA 为模板通过PCR 扩增获得。