一种通过诱导体细胞胚获得非洲菊再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种通过诱导体细胞胚获得非洲菊再生植株的方法，以非洲菊花托为外植体材料，培养于含6‑苄氨基嘌呤、激动素、苯基噻二唑基脲、萘乙酸、毒莠定、水解酪蛋白的体细胞胚诱导培养基中，诱导体细胞胚，体细胞胚萌发后，将其继代培养于分化培养基中，获得再生植株。本发明以非洲菊的花托做外植体，不经过愈伤组织阶段，通过体细胞胚途径获得再生植株，可避免外植体经脱分化诱导愈伤组织再生植株途径而发生突变。利用本发明进行非洲菊组织培养培育种苗，使培养程序简化、培养周期缩短、种苗质量提高，为非洲菊的大量离体繁殖优质种苗及转基因研究提供基础材料。

主权项

一种通过诱导体细胞胚获得非洲菊再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选取非洲菊花蕾，清洗，70％酒精消毒30‑60s，0.1％HgCl₂消毒8‑14min，用无菌水冲洗，吸干表面水分待用；2)剥去非洲菊花蕾上的花萼和小花序，得到花托，并切去花托的外表层，作为外植体；3)将步骤2)的外植体整体接种到诱导培养基中，弱光照培养5～8天；4)将步骤3)培养的外植体置于强光照下培养，培养45‑50天，获得非洲菊体细胞胚，继续培养10‑15天，体细胞胚逐渐萌发，形成小芽；5)将萌发2‑3片叶的非洲菊体胚小芽转接于新鲜的分化培养基上，小芽不断生长发育，叶片数逐渐增多，基部形成根系，获得再生植株；其中，步骤3)所述诱导培养基的组分为：其中，每升诱导培养基添加蔗糖30‑40克，琼脂粉6.5‑8.0克；所述诱导培养基pH＝5.5‑6.5；其中，步骤5)所述的分化培养基组分如下：其中，每升分化培养基添加蔗糖25‑35克，琼脂粉6.5‑7.0克；所述分化培养基pH＝5.5‑6.5。