一种Y染色体标记方法及其应用

摘要

本发明公开了一种Y染色体标记方法及其应用。本发明公开一种动物Y染色体标记方法，是利用TALEN方法对离体的动物体细胞的Y染色体进行特异性标记。采用本发明公开的方法，可以实现对动物性别的方便、简单、高效、安全、准确的早期鉴定，为选择性培育特定性别的动物、提高育种效率奠定基础。

主权项

一种动物Y染色体标记方法，是利用TALEN方法对离体的动物体细胞的Y染色体进行特异性标记；所述特异性标记是在Y染色体的性别决定基因SRY上进行标记；所述标记对其所在的动物的体细胞和生殖细胞不产生危害；所述标记的基因为自身发光或催化底物显色的蛋白的编码基因；所述对离体的动物体细胞的Y染色体进行特异性标记的方法为：使TALE蛋白‑Ⅰ和TALE蛋白‑Ⅱ在雄性动物A的离体体细胞中表达，得到Y染色体上靶序列发生突变的体细胞；同时将标记基因同源重组到靶序列位置，实现标记基因在雄性动物A的离体体细胞Y染色体上靶序列处的定点整合；所述TALE蛋白‑Ⅰ的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述TALE蛋白‑Ⅱ的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；所述靶序列如SEQ ID No.1所示；所述使TALE蛋白‑Ⅰ和TALE蛋白‑Ⅱ在雄性动物A的离体体细胞中表达的方法为：将分别含有TALE蛋白‑Ⅰ和TALE蛋白‑Ⅱ编码基因的重组表达质粒导入所述雄性动物A的离体体细胞中；所述TALE蛋白‑Ⅰ的编码基因序列如SEQ ID No.2所示；所述TALE蛋白‑Ⅱ的编码基因序列如SEQ ID No.4所示；所述将标记基因同源重组到靶序列位置的方法为将所述标记基因通过线性化的同源重组载体整合到所述靶序列位置；所述线性化的同源重组载体上具有靶序列同源左臂‑标记基因‑靶序列同源右臂的片段；所述靶序列同源左臂的序列如SEQ ID No.12中自5’末端起第664位至第1498位核苷酸所示；所述靶序列同源右臂的序列如SEQ ID No.12中自5’末端起第4068位至第4991位核苷酸所示。