一种构建高通量测序文库的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及一种构建可以同时捕获多个扩增片段的测序文库的方法和试剂盒。所述方法包括以下步骤：第一轮扩增；消化引物；第二轮扩增；纯化回收；测序；分析。本发明通过合理的引物设计和PCR策略，在PCR产物的5`末端直接添加D5接头引物和D7接头引物序列。通过对每个样本都引入可区分的标签序列，使样本在第二代高通量测序技术检测时，每个样本的测序结果都可以通过其独特的标签序列找回，可以应用于同时检测大量样本的多个不同基因位点，大大降低了测序成本。

主权项

一种构建高通量测序文库的方法，特别是一种构建可以同时捕获多个扩增片段的测序文库的方法，包括以下步骤：第一轮扩增：采用包括由与选自D5接头引物序列和D7接头引物序列中一者的3’端通用的测序引物序列的全部或部分相同的序列和各个基因的正向特异性扩增引物序列串联连接组成的第一轮正向扩增引物以及由与选自D5接头引物序列和D7接头引物序列中另一者的3’端通用的测序引物序列的全部或部分相同的序列和各个基因的反向特异性扩增引物序列串联连接组成的第一轮反向扩增引物的第一轮扩增引物的组合对各样本的一个或多个特定基因进行扩增，使每个扩增产物片段的两端都加上了所述通用的测序引物序列的部分或全部，其中，所述D5接头引物序列选自SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:8中，所述D7接头引物序列选自SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:20中；消化引物：用单链消化酶消化第一轮扩增产物中剩余的引物和引物二聚体；第二轮扩增：采用由与选自所述D5接头引物序列和D7接头引物序列中一者相同的第二轮正向扩增引物以及与选自D5接头引物序列和D7接头引物序列中另一者相同的第二轮反向扩增引物组成的第二轮扩增引物的组合进行扩增，使最后的扩增产物又都加上了可区分各样本的对应于D5接头引物序列和D7接头引物序列的标签序列；纯化回收：使用纯化磁珠筛选回收目标区域范围之间的所有DNA条带；测序：回收的产物进行定量后，将不同标签的产物按照测序数据量要求混合后进行上机测序；分析：基于每个样本的标签序列，将获得的测序结果与样本一一对应，以及根据每个基因的引物序列，将序列对应到样本的每个基因上。