一种淀粉糖原的合成方法

摘要

一种淀粉糖原的合成方法，属于变性淀粉资源开发技术领域。本发明原理基于利用淀粉分支酶的转糖基作用，将聚合度均一化糊精嫁接于支链淀粉分子上，制备高度支化，结构类似动物糖原的植物性淀粉糖原。主要步骤为：以一定比例的DP10‑20的糊精和A链DP10‑20糯米淀粉为底物，分散于100mL的50mM、pH7.4的Tris‑HCl缓冲液中，沸水浴糊化20min，冷却至37℃后加入600U来源于灌浆期糯米籽粒的淀粉分支酶，恒温水浴反应6h，沸水浴10min灭酶，3000g离心5min去除沉淀，用5倍体积的无水乙醇分离淀粉产物，40℃烘干、粉碎即得淀粉糖原产品。该类淀粉糖原为短多分支淀粉（A链DP10‑20），适用于光敏性组分包埋保护、药物缓释等领域。

主权项

一种淀粉糖原的合成方法，其特征在于包括聚合度均一化底物糊精的制备、灌浆期糯米淀粉分支酶的筛选、淀粉糖原的酶法合成步骤；以聚合度DP10‑20的糊精和A链DP10‑20糯米淀粉为底物，利用从灌浆期糯米籽粒胚乳中提取的淀粉分支酶的转糖基作用来催化转化底物，将糊精接到糯米淀粉分支上，合成短链DP10‑20、高分支化类似动物糖原的植物性淀粉糖原产品；具体步骤为：（1）底物的制备与选择：选取A链DP10‑20的糯米淀粉和DP10‑20直链糊精为底物；聚合度均一化的DP10‑20直链糊精，由木薯淀粉经过醇酸降解，8000Da的聚乙二醇逐步沉淀分级得到：称取50g木薯淀粉分散于500mL正丁醇中，加入5mL浓盐酸，于40℃下降解3d，加入1M NaNO₃终止反应，4000g离心15min，用50%乙醇洗涤沉淀数次至无氯离子，40℃烘箱干燥24h，粉碎，过筛；将降解的淀粉用蒸馏水配置成100mL 的3.2%的糊精溶液，逐步加入数均分子量8000Da的聚乙二醇，加热搅拌至聚乙二醇溶解，在空气中自然冷却到25℃，置于25℃水浴锅24h，于4000g下离心20min，取聚乙二醇加入量在50‑60g之间离心得到的浓相，用三氯甲烷洗涤除去残留的聚乙二醇，40℃干燥24h，粉碎，即为DP10‑20直链糊精；（2）灌浆期糯米籽粒淀粉分支酶的提取：采用的淀粉分支酶由灌浆12‑15天的传统糯米籽粒胚乳中提取获得；称取50g灌浆12‑15天的传统糯米籽粒，加入150mL的50mM、pH 7.4的Tris‑HCl缓冲液，经匀浆、过滤、离心后获得粗酶液，并进一步过DEAE柱、Toyopearl HW‑55F柱，收集活性成分并用SDS‑PAGE电泳鉴定酶的组成与纯度，于4℃下储存，备用；（3）淀粉糖原的合成：称取A链DP10‑20的糯米淀粉和DP10‑20直链糊精，质量比1:1～1:2，总共10g，分散于100mL的50mM pH 7.4的Tris‑HCl缓冲液中，沸水浴中加热20min至完全糊化，冷却至37℃，加入600U淀粉分支酶，于37℃振荡水浴中反应6h；沸水浴10min灭酶，3000g离心5min，去掉沉淀，清液用5倍体积的无水乙醇沉淀，5000g下离心15min；沉淀用乙醇反复洗涤三次，于40℃烘箱中过夜，干燥、粉碎得到产品淀粉糖原。