一种检测苹果轮纹病菌子囊孢子的方法

摘要

本发明公开了一种检测苹果轮纹病菌子囊孢子的方法，涉及轮纹病菌子囊孢子的检测技术。本方法适合检测苹果干腐病斑上轮纹病菌子囊孢子的发育进度和可释施子囊孢子的数量。具体方法为：从干腐病斑上切取完整的子实体，置于载玻片上，镜检子实体内容物，根据子实体内有无子囊和子囊孢子，及其所占比例，可以推断子囊孢子的发育进度；削取一定面积的干腐病皮，粘贴在水琼脂上，激发成熟的子囊孢子释放，用载玻片收集子囊孢子，镜检子囊孢子的释放量，根据子囊孢子释入量可以推断成熟子囊孢子的数量。本发明的优点在于：方法简洁，快速，结果可靠，为轮纹病研究、病害预测和防治决策提供了一套简便而又可靠的检测技术，填补了轮纹病研究中无子囊孢子检测技术的空白。

主权项

一种检测苹果轮纹病菌子囊孢子的方法，其特征在于：用于检测苹果干腐病斑上轮纹病菌子囊孢子的发育进度和可释放子囊孢子的数量；用特制刀片从检测样品上切取一定数量的子实体，置于载玻片上压破、镜检，可检测子囊孢子的发育进度；切取一定面积的干腐病斑，粘贴在水琼脂平板上，促使成熟的子囊孢子释放，用载玻片收集释放的子囊孢子，镜检孢子数量，可推算可释放子囊孢子的数量；具体过程包括取样、制作刀片、切取子实体、镜检子囊孢子发育进度、制作水琼脂平板、促使子囊孢子释放、收集子囊孢子、镜检子囊孢子数量等步骤；所述干腐病斑是指苹果枝条被轮纹病菌侵染并导致皮层枯死后形成病斑；轮纹病菌在干腐病斑上能产生分生孢子和子囊孢子两种类型的孢子；所述子囊孢子的发育进度是指病菌在形成子囊孢子的发育过程中所处时期，由未发育子实体、已形成子囊的子囊壳、已形成子囊孢子的子囊壳和已释入子囊孢子的子囊壳四类子实体的相对比率表示；所述可释放的子囊孢子是指已经发育成熟，遇水后能够弹射释放的子囊孢子；在果园中可释的子囊孢子遇雨立即释放，并随气流传播侵染枝条和果实；所述取样是指随机抽取所需检测的样品，检测样品分三类：1）前一年秋季和当年春季枯死枝条上形成的干腐病斑；2）冬春季节从树上修剪下来枝条上形成的干腐病斑；3）前一年已经产生分生孢子或子囊孢子的干腐病斑；三类枝条上子囊孢子的发育进度不同，所形成子囊孢子的数量不同，在子囊孢子的检测中应分别取样；所述制作刀片是指制作切取子实体的特制刀片；取双面剃须刀片，从中间掰为两半，用火焰将一角烧红，再用剪刀从刀片中央剪向烧制一角斜剪，剪出带有一定弧度的刀尖；所述切取子实体是指用带有弧度的刀尖从待检测样品上切取的体积最大的子实体，每个枝条上2~20个，一般为10个，置于载玻片上压破，用于镜检；所述镜检子囊孢子发育进度是指在100倍的显微镜下检查子实体内容物，并根据内容物的有无和形态将子实体分成不同类别，统计各类子实体的相对比率，用各类子实体的相对比率表示子囊孢子的发育进度；所述制作水琼脂平板是指称取一定量琼脂粉，加入蒸馏水，并加热至沸腾，边加热边搅拌，使琼脂粉融化，倒入培养皿中，冷凝后制成水琼脂平板；水琼脂的浓度为0.5~5%，常用浓度为1%；所述促使子囊孢子释放是指削取一定面积干腐病皮，粘贴在水琼脂平板上，有子实体的一面背对琼脂平板，使成熟的子囊从水琼脂中吸水，膨胀后弹出子囊孢子；所述收集子囊孢子是指在病皮下放置干净在载玻片，距离病皮不超过0.5cm，收集从病皮上弹射出来的子囊孢子；所述镜检子囊孢子的数量是指在显微镜下检查记录着落到载玻片上所有子囊孢子的数量。