一种棘头梅童鱼精子超低温冷冻保存方法

摘要

一种棘头梅童鱼精子超低温冷冻保存方法，其特征是选择海区捕获性成熟的棘头梅童鱼雄鱼获取精巢，用剪刀将精巢破碎，沾取精液于海水中激活后，立即在光学显微镜下观察精子活力，有活动能力精子数占总精子数的比例在50％以上的精液用于超低温冷冻保存；破碎后的精巢按体积比1:4‑1:5与冷冻保护液混匀，去除精巢碎块后将精子混合液分装于2ml冻存管中，每管装入1.5ml；将装有精子混合液的冻存管室在温下平衡2min，液氮面上方10‑15cm的液氮蒸汽中平衡15min后放入液氮‑196℃中冷冻保存；冷冻精子于37℃水浴中解冻复活，解冻后光学显微镜下检查精子活力。

主权项

一种棘头梅童鱼精子超低温冷冻保存方法，包括棘头梅童鱼精子采集及活力检测、精子冷冻保护液的配制、精子与冷冻保护液的混合、降温及冷冻保存、精子解冻复活，其特征是棘头梅童鱼精子采集及活力检测通过以下方法实现：选择海区捕获性成熟的棘头梅童鱼雄鱼获取精巢，用剪刀将精巢破碎，沾取精液于海水中激活后，立即在光学显微镜下观察精子活力，有活动能力精子数占总精子数的比例在50％以上的精液用于超低温冷冻保存；精子冷冻保护液的配制通过以下方法实现：在每升蒸馏水中加入NaCl 4.0g、NaH₂PO₄0.2g、NaHCO₃0.2g、KCl 0.4g、CaCl₂·2H₂O 0.1g、MgCl₂·6H₂O 0.2g、葡萄糖10g配制成稀释液，在稀释液中加入体积比为10％的DMSO配制成精子冷冻保护液；精子与冷冻保护液的混合通过以下方法实现：破碎后的精巢按体积比1:4‑1:5与冷冻保护液混匀，去除精巢碎块后将精子混合液分装于2ml冻存管中，每管装入1.5ml；降温及冷冻保存通过以下方法实现：将装有精子混合液的冻存管室温下平衡2min，液氮面上方10‑15cm的液氮蒸汽中平衡15min后放入液氮中‑196℃冷冻保存；精子解冻复活通过以下方法实现：冷冻精子于37℃水浴中解冻复活，解冻后光学显微镜下检查精子活力。