一种丹参多酚酸注射液的含量检测方法

摘要

本发明提供了一种注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇的含量检测方法，基于核磁共振法(¹H‑NMR)对注射用丹参多酚酸中的主要成分及辅料同时进行含量测定。该方法具有简便易行、稳定性好、精密度高、重现性好、专属性强等特点，在全面检测注射用丹参多酚酸质量方面具有广阔的应用前景。

主权项

一种丹参多酚酸注射液的含量检测方法，其特征在于：基于核磁共振法(¹H‑NMR)对注射用丹参多酚酸中的多种成分同时进行含量测定，具体步骤为：(1)内标溶液的配制称取K₂HPO₄、NaH₂PO₄与内标物TSP于容量瓶中，用D₂O(重水)溶解并定容至刻度线，用于所有实验溶剂；(2)对照品溶液的制备分别精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇对照品，分别制成相应的对照品储备液；(3)供试品溶液的制备精密称取注射用丹参多酚酸冻干粉并加入上述内标溶液中溶解，其中，每20mg丹参多酚酸冻干粉加入1ml内标溶液，得供试品溶液，将所述供试品溶液可转移至5mm核磁管中，直接用于¹H‑NMR测试；(4)¹H‑NMR指纹图谱的测定将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定注射用丹参多酚酸样品溶液的¹H‑NMR指纹图谱和对照品溶液的¹H‑NMR图谱，所有的一维¹H‑NMR谱均在298K下采集，脉冲序列zgcppr抑制水峰，谱宽设置为12335.5Hz，弛豫延迟时间为20s确保所有信号完全弛豫，采样点数32k，扫描次数：16次；为对其信号进行归属，测定指定样品的2D NMR谱，包括：¹H‑¹H COSY,¹H‑¹H TOCSY,¹H‑¹³C HSQC和¹H‑¹³C HMBC谱；(5)样品¹H‑NMR图谱分析依据NMR谱及文献数据，鉴定迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸、甘露醇，采用MetresNova软件对得到的¹H‑NMR指纹图谱依次进行相位调整、基线校正、定标，并对其信号进行归属；所述迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸、甘露醇的信号进行归属如下：(6)¹H‑NMR多成分的含量测定在上述实验条件下采集图谱，对迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸和甘露醇以及内标物TSP的定量峰分别进行积分，按照¹H‑NMR内标法根据积分结果依照下式计算样品的质量：$\frac{A_{\mathrm{TSP}}}{A_S}=\frac{n_{\mathrm{TSP}}{W}_{\mathrm{TSP}}/M_{\mathrm{TSP}}}{n_S{W}_S/M_S}$其中，A_TSP和A_S分别是TSP甲基峰和化合物定量峰的积分面积，n_TSP和n_S分别代表TSP甲基峰和化合物定量峰的质子个数，W_TSP和W_S分别是TSP和化合物的质量，M_TSP和M_S分别是TSP和化合物的分子量。