大白菜杂交种豫新55种子纯度的SSR鉴定方法

摘要

本发明公开了蔬菜育种技术领域的大白菜杂交种豫新55种子纯度的SSR鉴定方法，包括材料准备、DNA提取、基因组模板原液制备、引物筛选和结果分析的步骤，所述大白菜杂交种豫新55种子纯度的SSR鉴定方法，具体步骤如下：S1：材料准备：S2：DNA提取：S3：基因组模板原液制备：S4：引物筛选：S5：结果分析：本方法能够有效的鉴别不同甚至亲缘关系很近的基因型，在杂交种纯度鉴定方面为比较理想的方法，该方法具有准确、快速和共显性，易于分析，分析结果可靠的优点，在进行杂交种纯度鉴定时只需一次PCR扩增即可将PCR扩增后的产物分开，便于实现规模化的检测，同时不受天气因素的影响，具有很强的实用性。

主权项

大白菜杂交种豫新55种子纯度的SSR鉴定方法，包括材料准备、DNA提取、基因组模板原液制备、引物筛选和结果分析的步骤，其特征在于：所述大白菜杂交种豫新55种子纯度的SSR鉴定方法，具体步骤如下：S1：材料准备：对10‑20份的豫新55大白菜杂交种进行田间随机取样，并通过公布的大白菜EST序列信息，利用人工合成制得SSR引物；S2：DNA提取：利用单株大白菜上的嫩叶进行大白菜基因组DNA提取；S3：基因组模板原液制备：将步骤S2中的溶液以13000r/min的速率离心5‑15min，吸取200‑400μL的上清液，加入预先加好的200‑400μL异丙醇的离心管中，进行上下颠倒混匀，再加入200‑400μL，浓度为65‑85％的酒精，9000‑11000r/min离心2‑4min，弃上清液，隔夜晾干DNA后，加入40‑60μL双蒸水溶解DNA，制备出基因组模板原液；S4：引物筛选：以豫新55大白菜杂交种及其母本和父本的基因组DNA为模板，对SSR引物进行PCR扩增，扩增后的产物采用9％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离、染色，筛选杂交种带型为母本和父本互补的引物，其中PCR反映体系的体积为100‑120μL；S5：结果分析：采用凝胶成像系统对基因组模板原液进行拍照，并分析DNA的完整性，测定DNA浓度，通过银染程序显色后，利用数码相机进行拍照，统计分析检测结果。