发明名称 |
一种遗传标记在紫杏鉴定中的应用 |
摘要 |
本发明属于植物遗传标记制备与应用技术领域。具体涉及一种遗传标记在紫杏鉴定中的应用,本发明利用DNA条形码基因序列,建立PCR扩增方法和采用0.5%的琼脂糖凝胶电泳图谱直接检测紫杏(P.dasycarpa Ehrh.)的特征条带,若在一个泳道上同时出现2条分子量大小约750bp和720bp片段则能够判断是紫杏,若仅仅有一条720bp的片段判定为普通栽培杏。本发明可快速、精准地对紫杏和其他栽培杏进行分子鉴定,本发明简化了鉴定程序,降低了鉴定成本。 |
申请公布号 |
CN106544438A |
申请公布日期 |
2017.03.29 |
申请号 |
CN201611079643.5 |
申请日期 |
2016.11.29 |
申请人 |
塔里木大学 |
发明人 |
郭玲;周慧杰;罗华平 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
张红兵 |
主权项 |
如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示序列的遗传标记在紫杏鉴定中的应用,其特征在于,所述的应用包括下列步骤(1)从待测杏属材料中提取基因组DNA;(2)以登陆号为KX890450与登陆号KX890452和登陆号为KX890451与KX890449两条ITS序列作为模板设计引物,进行PCR扩增:所述引物的序列如下所述:ITS‑5:GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG‑3,ITS‑4:TCCTCCGCTTATTGATATGC;(3)按照如下反应体系进行:在50μL体系中含有1×Buffer,1.5mmol/L Mg<sup>2+</sup>,0.20mmol/L dNTPs,引物各0.20mmol/L,Taq DNA聚合酶1U,0.1mg/mL BSA,4%DMSO,30‑50ng模板DNA;(4)按照如下程序扩增:96℃预变性5min,96℃变性30s,50℃退火45s,72℃延伸1min,循环30次,最后72℃延伸至7min;(5)将所得的PCR产物用0.5%琼脂糖电泳进行检测,按照如下步骤进行:待凝胶完全凝固,小心拔去梳子;将电泳样品依次加入点样孔中;将制胶板放入电泳槽中,使电泳缓冲液淹没过凝胶1mm,打开电泳仪,使核酸样品由负极向正极泳动,电泳时间为35min;电泳完成后切断电源,取出凝胶,放入凝胶成像系统中观察电泳结果,并照相记录;对跑胶带进行研判,若在一个泳道上同时出现2条分子量大小为750bp和720bp片段鉴定为紫杏,若仅仅有一条720bp的片段鉴定为其他类型的杏。 |
地址 |
843300 新疆维吾尔自治区阿克苏地区阿拉尔市虹桥南路705号 |