高产量的细菌多糖的制备

摘要

本发明提供了改进的培养、发酵及纯化条件，用于制备脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)多糖。本发明特别涉及一种新型发酵培养基、最佳料液添加策略以及用于获得高产量的脑膜炎奈瑟菌X多糖、没有使用任何色谱方法的改进的纯化方法。

主权项

一种制备具有高产量和高纯度的脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)血清组X荚膜多糖的新型方法，所述方法包括步骤：(a)制备含酪蛋白氨基酸的液体发酵罐营养培养基；(b)在所述发酵罐营养培养基中接种具有光学密度为0.8到1.2的脑膜炎奈瑟菌X菌种；(c)在OD值介于3和4之间时，开始以在10mL/hr/1.5L和60mL/hr/1.5L之间变化的加料速率连续指数添加料液；(d)在受控的pH、温度以及溶氧百分率条件下，培养经接种的所述发酵罐营养培养基；(e)当在590nm的光学密度(OD)小于最高培养菌OD的60％时，收获步骤(d)中产生的荚膜糖；(f)纯化在步骤(e)中得到的所述荚膜多糖；(g)浓缩在步骤(f)中得到的所述纯化的荚膜多糖；以及其中，所述纯化的多糖具有300到550mg/L的产量、400到550KDa的平均分子量、60％到65％的纯化步骤回收率，并且含有小于0.5％的蛋白质/肽、小于0.5％的核酸和小于5EU/μg的内毒素。