一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶

摘要

本发明公开了一种新的定向进化技术SNDS及所获得耐热高效甲基对硫磷水解杂合酶。本发明以两个亲本酶基因的互补单链DNA为出发序列分别进行酶切消化，消化后产物不经回收直接混合进行无引物PCR、构建突变体库并筛选有益突变体。本发明方法实现序列相似性较低的两个亲本基因的突变，有效扩展了DNA改组方法的应用；简化小片段回收步骤；实现100％重组并显著降低传统DNA shuffling所存在的重组偏好性，产生更好的基因多样性及重组类型，能够在很少的重组子中筛选到有益突变。采用本发明方法对序列相似性仅为50.9％的甲基对硫磷水解酶的OPHC2和MPH基因进行突变重排，筛选获得高效耐热的甲基对硫磷水解杂合酶。

主权项

一种蛋白质的定向进化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以编码该蛋白质的两条互补单链亲本DNA序列为出发序列，将两条出发序列分别用DNase I进行酶切消化；(2)酶切消化后的产物不经回收直接混合进行无引物PCR；(3)以无引物PCR的产物为模板进行有引物PCR，回收PCR产物；(4)利用所回收的PCR产物构建突变体库；(5)从突变体库中筛选目标突变体，即得。