一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法

摘要

本发明公开了一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法，属于生物技术领域。本发明根据GeneBank中人胃乙醇脱氢酶δδ‑ADH的基因序列合成目的基因，将其与表达载体pET‑32a(+)连接并转化E.coli BL21(DE3)。E.coli BL21(DE3)经异丙基硫化‑β‑D‑半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白，目的蛋白以包涵体形式存在。收集并破碎菌体后离心，取沉淀获得包涵体，用低浓度尿素溶液或其缓冲液溶解包涵体获得有活性的δδ‑ADH粗酶液。经HisTrap^TM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白，活性在2.085U/mg以上。本发明提供的工程菌所产生的δδ‑ADH可氧化高浓度的乙醇，其在大肠杆菌中以包涵体形式存在；有活性的δδ‑ADH粗酶液只需经包涵体溶解液溶解即可获得，不需要复性操作，可节约成本、简化操作步骤，提高效率。

主权项

一株产乙醇脱氢酶的微生物重组菌，其特征在于，所述重组菌以大肠杆菌为宿主、pET系载体为表达载体，表达了氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的乙醇脱氢酶δδ‑ADH。