一种酵母细胞及酵母抽提物中还原型谷胱甘肽的检测方法

摘要

一种酵母细胞及酵母抽提物中还原型谷胱甘肽的检测方法，利用高效液相色谱仪，通过外标法对还原型谷胱甘肽进行定性、定量检测。本方法利用甲醇/水二元流动相(其中水相中添加庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾和磷酸)，通过调节溶液pH值或者调节两相配比或者协同调节来调控还原型谷胱甘肽在色谱柱上的保留时间，提高理论塔板数，改善色谱峰型，使得酵母中还原型谷胱甘肽含量检测准确可信。本方法操作简单、高效，为控制酵母细胞发酵生产谷胱甘肽工艺中谷胱甘肽的检测提供了良好的参考，为提高谷胱甘肽原料的质量标准提供了方法依据。

主权项

一种酵母细胞及酵母抽提物中还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选择对照物质：选择还原型谷胱甘肽作为对照物质，纯度>99.9％；(2)制备标准品溶液：取还原型谷胱甘肽标准品80mg，加入去离子水溶解，定容至10mL，摇匀，得到还原型谷胱甘肽标准储备液(8mg/mL)；再依次将标准储备液分别配制成4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL和0.25mg/mL的储备液；(3)制备供试品溶液：取安琪酵母股份有限公司生产的酵母粉1g，加入10mL去离子水，80℃下提取15分钟，迅速置于冰水中冷却至室温，4000rpm/min下离心10分钟，取上清液，得到供试品溶液；(4)液相色谱测定：分别取还原型谷胱甘肽标准品溶液注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以还原型谷胱甘肽浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标进行线性回归分析，制得线性方程，取稀释一定倍数(稀释后还原型GSH浓度介于1.0至3.0mg/mL之间的稀释倍数为最佳稀释倍数)的供试品溶液注入高效液相色谱仪，供试品色谱图中出峰时间及峰形与对照品溶液色谱图中还原型谷胱甘肽的出峰时间及峰形进行比对，判定供试品溶液含有谷胱甘肽物质，将供试品色谱图中还原型谷胱甘肽峰面积数值代入线性方程，即可计算出酵母细胞及酵母抽提物中还原型谷胱甘肽的含量。