改良型腈水合酶

摘要

通过野生型腈水合酶的改良，提供耐热性、酰胺化合物耐性以及高温累积性进一步提高了的具有腈水合酶活性的蛋白质。使用一种蛋白质，其为以下的(A)或(B)的蛋白质；(A)蛋白质，其特征在于，包含在野生型腈水合酶的氨基酸序列中特定的氨基酸残基被置换为其他的氨基酸残基而成的氨基酸序列，并且具有腈水合酶活性；(B)蛋白质，其特征在于，包含在上述(A)的蛋白质的氨基酸序列中除了上述特定的氨基酸残基之外缺失、置换和/或附加有1个或数个氨基酸残基而成的氨基酸序列，并且具有腈水合酶活性。

主权项

一种蛋白质，其为以下(A)的蛋白质；(A)蛋白质，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列为野生型腈水合酶的氨基酸序列的氨基酸残基被置换为如下所述其他的氨基酸残基而成的氨基酸序列，并且具有腈水合酶活性，所述野生型腈水合酶为来源于红球菌J1‑H的腈水合酶，所述红球菌J1‑H中α亚基的氨基酸序列为序列号4所示的氨基酸序列，β亚基的氨基酸序列为序列号2的所示氨基酸序列，被置换的氨基酸残基为下述氨基酸残基：(1)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(n)、和(i)的氨基酸残基和选自(p)或(p’)的氨基酸残基；(2)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(n)、(p)和(i)的氨基酸残基和选自(f)或(k)或(m)的氨基酸残基；(3)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(n)、(p)和(f)的氨基酸残基；(a)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第167位残基的氨基酸残基置换为丝氨酸、(b)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第219位残基的氨基酸残基置换为丙氨酸、(c)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第57位残基的氨基酸残基置换为蛋氨酸、(d)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第114位残基的氨基酸残基置换为酪氨酸、(e)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第107位残基的氨基酸残基置换为赖氨酸、(f)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第218位残基的氨基酸残基置换为组氨酸、(i)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第144位残基的氨基酸残基置换为丝氨酸、(k)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第112位残基的氨基酸残基置换为苏氨酸、(m)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第95位残基的氨基酸残基置换为缬氨酸、(n)β亚基的氨基酸序列中，由N末端的氨基酸残基开始数第17位残基的氨基酸残基置换为甘氨酸、(p)α亚基的氨基酸序列中，由构成辅基结合区域的氨基酸序列C(S/T)LCSC的最下游侧的C残基起第67位残基的氨基酸残基置换为亮氨酸、(p’)α亚基的氨基酸序列中，由构成辅基结合区域的氨基酸序列C(S/T)LCSC的最下游侧的C残基起第67位残基的氨基酸残基置换为缬氨酸。