一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用

摘要

本发明公开了一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用。该方法将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶1～3混合，得到混合菌液；再将混合菌液按体积比0.5～2％接种到上述混合提取液中，发酵得到发酵液；过滤后减压浓缩至相对密度为1.0522～1.0833的浸膏，即得降低刺激的发酵烟叶提取物。本发明以以烟叶提取液、灰树花提取液和荔枝核提取液组成的混合提取液作为碳源、氮源、以及底物，为卷烟本源物质，容易让微生物酶体系利用来发酵产烟香，本发明方法工艺过程简单，原料为卷烟产品本源烟叶，有工业化使用前景。

主权项

一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法，它包括以下步骤：1)将烟叶粉碎至60～80目，再将烟末和水按质量比1∶30～50回流提取1～3h后过滤，重复1～3次回流提取滤液，合并滤液，即得烟叶提取液，并灭菌；2)按重量份数比称取40～80份的烟叶提取液、20～40份的灰树花提取液和5～20份的荔枝核提取液，混合均匀，得到混合提取液；3)植生拉乌尔菌菌种活化：将植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4‑4CCTCC NO:M 2012005接种到植生拉乌尔菌斜面培养基上，在25～38℃，静置培养24～72h后得到活化菌种，置于冰箱中；4)制备植生拉乌尔菌种子培养液：将步骤3)中所得的活化菌种，接种到植生拉乌尔菌种子培养基，在25～38℃条件下，100～150r/min振荡培养24h～72h，连续转接1～3次，制得植生拉乌尔菌种子培养液；5)食甲醇芽孢杆菌斜面培养：将食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus VJ4‑1CCTCC NO:M 2012004接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，在25～35℃、pH5～9条件下，静置培养24～72h；6)制备食甲醇芽孢杆菌种子培养液：用步骤5)所得的斜面培养物，接种到食甲醇芽孢杆菌种子培养基，在25～35℃条件下，100～150rpm振荡培养24h～72h，连续转接1～4次，制得食甲醇芽孢杆菌种子培养液；7)将植生拉乌尔菌种子培养液和食甲醇芽孢杆菌种子培养液按重量比1∶1～3混合，得到混合菌液；8)发酵：将混合菌液按体积比0.5～2％接种到上述混合提取液中，接种后的混合提取液的装罐量为25～45％，pH5～8，温度30～40℃，转速100～200r/min，不避光条件下发酵3～7天，得到发酵液；9)将发酵液和体积份数为80～90％乙醇按体积比1∶2～6，沉淀过夜，4000～10000r/min离心10～30min，过滤后减压浓缩至相对密度为1.0522～1.0833的浸膏，即得降低刺激的发酵烟叶提取物。