发明名称 |
一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒 |
摘要 |
本发明公开了一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒,包括:E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组、E‑21引物组、E‑2引物组、E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针、E‑2检测探针和内标检测探针;E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团,3’端均修饰有第一荧光猝灭基团;内标检测探针的序列与E‑2检测探针的序列相同,其5’端修饰有第二荧光报告基团,3’端均修饰有第二荧光猝灭基团。本发明以人类EGFR基因突变为检测对象,通过特异引物的优化组合以及荧光探针,从而实现准确、简单、快速地同时检测EGFR基因突变,而且检测突变的能力高。 |
申请公布号 |
CN106520994A |
申请公布日期 |
2017.03.22 |
申请号 |
CN201611138813.2 |
申请日期 |
2016.12.12 |
申请人 |
厦门飞朔生物技术有限公司 |
发明人 |
陈琰;郭飞飞 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 |
代理人 |
张松亭;姜谧 |
主权项 |
一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒,其特征在于:包括:E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组、E‑21引物组、E‑2引物组、E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针、E‑2检测探针和内标检测探针;E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团,3’端均修饰有第一荧光猝灭基团;内标检测探针的序列与E‑2检测探针的序列相同,其5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团,3’端均修饰有第二荧光猝灭基团;其中,E‑18引物组由正向引物E‑18‑M1‑F、E‑18‑M2‑F、E‑18‑M3‑F和反向引物E‑18‑R组成,依次包括如SEQ ID NO 01至04所示的序列;E‑19引物组由正向引物E‑19‑M1‑F、E‑19‑M2‑F、E‑19‑M3‑F、E‑19‑M4‑F、E‑19‑M5‑F、E‑19‑M6‑F、E‑19‑M7‑F、E‑19‑M8‑F、E‑19‑M9‑F、E‑19‑M10‑F、E‑19‑M11‑F、E‑19‑M12‑F、E‑19‑M13‑F、E‑19‑M14‑F、E‑19‑M15‑F、E‑19‑M16‑F、E‑19‑M17‑F、E‑19‑M18‑F、E‑19‑M19‑F和反向引物E‑19‑R组成,依次包括如SEQ ID NO 05至24所示的序列;E‑20引物组由正向引物E‑20‑M1‑F、E‑20‑M2‑F、E‑20‑M3‑F、E‑20‑M4‑F、E‑20‑M5‑F和反向引物E‑20‑R组成,依次包括如SEQ ID NO 25至30所示的序列;E‑21引物组由正向引物E‑21‑M1‑F、E‑21‑M2‑F和反向引物E‑21‑R组成,依次包括如SEQ ID NO 31至33所示的序列;E‑2引物组由正向引物E‑2‑F和反向引物E‑2‑R组成,依次包括如SEQ ID NO 34和35所示的序列;该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的组成如下:E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组和E‑21引物组之一中的一正向引物和一反向引物对应的E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针之一E‑2引物组内标检测探针1×PCR缓冲液MgCl<sub>2</sub>dNTPsTaq酶H<sub>2</sub>ODNA模板;该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的反应条件均为:95℃预变性5min,1个循环;95℃变性25s,60℃退火20s,72℃延伸10s,15个循环;95℃变性25s,60℃退火35s,72℃延伸10s,30个循环,后30个循环在退火时检测荧光信号。 |
地址 |
361000 福建省厦门市同安区西柯镇西洲路2041号 |