毛竹种胚诱导愈伤组织形成的方法

摘要

毛竹种胚诱导愈伤组织形成的方法，包括以下步骤：(1)筛选出生活力高于75％的毛竹种子；(2)取出筛选出的毛竹种子的种胚，切除50％以上的胚乳，依次用流水、乙醇、无菌水、次氯酸钠溶液、无菌水、加有吐温‑80的升汞进行处理，再去除表面水分备用；(3)将消毒后的种胚接种到诱导培养基上，暗培养7—10天使愈伤组织形成，然后将愈伤组织分离出来，接种到增殖培养基上增殖培养20—30天即可。本发明选取毛竹种子的种胚作为外植体，可以直接将毛竹种子的外种皮与内在种胚之间的缝隙处藏纳的污垢、泥土和细菌等污染物去除，从而有效降低污染率。本发明愈伤组织诱导率可以达到64.3％，而污染率能控制在20％以下，并且愈伤组织的形态优良，生长状态好。

主权项

毛竹种胚诱导愈伤组织形成的方法，包括以下步骤：(1)种子的筛选取毛竹种子，剥去外稃，采用TTC染色法对毛竹种子进行生活力测定，筛选出生活力高于75％的毛竹种子；(2)种胚的消毒取出筛选出的毛竹种子的种胚，切除50％—70％的胚乳，用流水冲洗2—4小时，然后置于70—75％(v/v)乙醇中浸泡2—4分钟，再用无菌水冲洗至表面光滑、背部沟槽中无明显异物，然后于无菌条件下，置于1—2％(v/v)次氯酸钠溶液中浸泡振荡15—20分钟，再用无菌水冲洗至表面光滑、背部沟槽中无明显异物，最后于无菌条件下，置于0.05—0.1％(w/v)升汞中，每升升汞还加有3—5滴吐温‑80，浸泡振荡30—40分钟，再去除表面水分备用；(3)愈伤组织的诱导与增殖将消毒后的种胚接种到诱导培养基上，暗培养7—10天使愈伤组织形成，然后将愈伤组织分离出来，接种到增殖培养基上增殖培养20—30天即可；所述诱导培养基是以N6/B5/MS复合培养基为基础，添加3—5mg/L的2，4‑D、0.1—0.3mg/L的ZT，500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺和300mg/L的水解酪蛋白，所述N6/B5/MS复合培养基包括1900mg/L的硝酸钾、1650mg/L的硝酸铵、170mg/L的磷酸二氢钾、370mg/L的七水合硫酸镁、440mg/L的二水合氯化钙、0.75mg/L的碘化钾、3.0mg/L的硼酸、10.0mg/L的一水合硫酸锰、2.0mg/L的七水合硫酸锌、0.25mg/L的二水合钼酸钠、0.025mg/L的六水合氯化钴、0.025mg/L的五水合硫酸铜、37.25mg/L的乙二胺四乙酸二钠、27.85mg/L的七水合硫酸亚铁、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸、2.0mg/L的甘氨酸、28g/L的蔗糖和8g/L的琼脂；所述增殖培养基是以MS培养基为基础，添加3—5mg/L的2，4‑D、500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺和300mg/L的水解酪蛋白。