检测动物源食品中残留药物的方法及液质数据库

摘要

本发明涉及一种用于检测动物源食品中残留药物的液质数据库及其使用方法，该数据库的制备包括如下步骤：(1)标准工作溶液的制备；(2)分析前处理，采用快速酶解+快速固相萃取(SPE)的提取净化技术进行待测样本分析前处理工作；(3)一次性进样色谱分析；(4)构建液质谱库。

主权项

一种检测动物源食品中高风险药物多种类残留的快速筛选液质谱库的构建方法，具体包括如下步骤，(1)标准工作溶液的制备；(2)分析前处理，采用快速酶解释放结合态残留+快速固相萃取的提取净化技术进行待测样本分析前处理工作；(3)一次性进样色谱分析；(4)构建液质谱库；所述的动物源食品为禽蛋类食品或蜂蜜类食品，所述的高风险药物为限量值在1.0μg/kg以下高风险残留药物，具体为：(a)甾体激素类化合物：睾酮、泼尼松龙、倍他米松、地塞米松；(b)硝基咪唑类药物及其代谢产物：甲硝哒唑、咯硝哒唑、二甲硝咪唑；(c)Beta‑受体激动剂类物质：克伦特罗、妥布特罗、西马特罗；(d)染料类物质：结晶紫和隐色结晶紫；步骤(1)所述的标准工作液的制备方法为：甾体激素类化合物、硝基咪唑类药物及其代谢产物、Beta‑受体激动剂类物质：采用乙腈分类配制浓度为0.01g/L的混合标准储备溶液；染料类物质采用甲醇分类配制浓度为0.01g/L的混合标准储备溶液；浓度为0.1mg/L混合标准工作溶液，分别移取睾酮、泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、甲硝唑、咯硝哒唑、二甲硝咪唑、克伦特罗、妥布特罗、西马特罗、结晶紫和隐色结晶紫标准储备溶液适量，用乙腈配制浓度为0.1mg/L的混合标准溶液；步骤(2)所述的分析前处理方法如下，1)提取：称取均质样品5g，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入浓度为0.2mol/L，pH 5.2的乙酸铵缓冲液15mL，β‑葡糖苷酸/硫酸酯酶50μL，涡旋混匀，50℃水浴振荡2h，放冷至室温，于0℃，15000rpm离心5min，转移上清至另一干净离心管中，用5mol/L的NaOH溶液调节pH至9.0，再加入乙酸乙酯20mL,氯化钠6g，振荡涡旋5min，于0℃，15000rpm离心5min，取上层有机相35℃旋蒸至近干，氮气吹干，残渣使用5mL 0.1mol/L盐酸溶液溶解，超声1min，留待上柱净化；2)净化：MCX柱安装于固相萃取装置上，依次使用甲醇3mL，水3mL，3mL 0.1mol/L盐酸溶液活化；将提取溶液加载在固相萃取柱上，在重力作用下流出，依次使用3mL水，3mL甲醇和5mL正己烷淋洗小柱，抽干2min，加入6mL洗脱液洗脱，洗脱液35℃下氮气流吹干，使用样品溶解液0.5mL溶解残渣，超声1min，过0.22μm微孔滤膜；所述的固相萃取装置整合试剂架、氮吹仪的功能，且操作压力相对均匀，其由试剂架、操作台、5～10个玻璃仓、5～10个梨形瓶和1～2个自动吸气装置组成，实现目标分析物的快速SPE过程；所述的步骤(2)的1)提取步骤中，如样品为蛋类样品，则加入适量硅藻土；所述的步骤(2)的2)净化步骤中，洗脱液的配置方法为：乙酸乙酯50mL，甲醇45mL，氨水5mL，混匀；样品溶解液的配置方法为：量取体积比0.1％甲酸乙腈溶液5mL，与5mmol/L的甲酸铵‑0.1％的甲酸‑水溶液95mL混匀；所述步骤(3)中所述的一次性进样色谱分析方法如下，使用色谱柱为Kinetex C18柱，采用乙腈为有机相，甲酸作为离子化增强剂，甲酸盐作为峰形优化剂，以水相/酸性乙腈的组合作为优化的流动相体系；具体条件为：色谱柱：Kinetex C18,2.6μm，2.1mm×100mm i.d.；流速：0.2mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：时间流动相成分0～2min，5％A，其余为B，8min，20％A，其余为B，15min，95％A，其余为B，16min，100％A，其余为B，19min，100％A，其余为B，20min，5％A，其余为B，A洗脱液为：0.1％甲酸‑乙腈溶液；B洗脱液为：5mmol/L的甲酸铵‑0.1％的甲酸‑水溶液。