一种虎奶菇菌丝体自溶蛋白质的制备方法

摘要

本发明涉及一种虎奶菇菌丝体自溶蛋白质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将菌种转移到PDA固体培养基上，置恒温暗培养箱中，30℃培养7 d，在40℃环境下保存备用；本发明所述方法制备的虎奶菇茵丝体自溶蛋白质，方法简单，蛋白产产量高，可工业化生产，实用性强。

主权项

一种虎奶菇菌丝体自溶蛋白质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将菌种转移到PDA固体培养基上，置恒温暗培养箱中，30℃培养7 d，在40℃环境下保存备用；（2）将上述平板培养基上的菌丝用组织捣碎机捣碎后，吸取培养基体积l％的量接种于GPY培养基中，振荡培养14 d后，以4800r/min，在4℃环境下离心收集菌丝体，将收集的菌丝体先用自来水冲洗，再用蒸馏水洗涤3次备用；（3）取l g虎奶菇菌丝置于预冷过的钵体中，加入液氮，快速研磨；待菌丝体成粉末状时，快速转移菌丝体至离心管中，加入10 mL丙酮(含10％TCA和0．07％B一巯基乙醇)，摇匀，沉淀过夜，ll 000 r·min，离心30 min后弃上清，以100％丙酮(含0．07％B一巯基乙醇)洗涤沉淀1次，11 000 r·min’1离心30 min后弃上清，再以80％丙酮(含0．07％13一巯基乙醇)洗涤沉淀1次，以ll 000 r·min离心30 min后弃上清液；将沉淀物真空干燥，于‑70℃至‑20℃环境下保存后备用；（4）将经温度处理后的菌丝体滤去，滤液离心取上清，加入1／10体积100％TCA，沉淀过夜，1l 000 r·min离心30 min后弃上清，重复以上操作，收集全部蛋白质沉淀，加入5 mL 80％冷丙酮(含0．07％一巯基乙醇，一20℃预冷)，振荡．放置‑20℃冰箱中5 h后，11 000 r·min离心30min，弃上清，所述沉淀物即为虎奶菇茵丝体自溶蛋白质，将其干燥后储存于‑70℃至‑20℃的环境中。