一种肿瘤特异抗原表位多肽负载的树突状细胞疫苗制备方法及其试剂盒

摘要

本发明提供了一种肿瘤特异抗原表位多肽负载的树突状细胞疫苗制备方法，其中，所述方法包括采用鉴定的肿瘤特异表达的上皮细胞粘附分子的人白细胞抗原A201阳性表位多肽，即SEQ ID NO.1‑6中任一项所示的氨基酸序列组成的多肽，并由SEQ ID NO.1‑6中一项以上多肽负载树突状细胞，制备成树突状细胞疫苗，可引发很强的靶向抗肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞反应。本发明还提供了制备所述肿瘤特异抗原表位多肽负载的树突状细胞疫苗的试剂盒。

主权项

一种肿瘤特异抗原表位多肽负载的树突状细胞疫苗制备方法，其特征在于，所述方法包括采用鉴定的肿瘤特异表达的上皮细胞粘附分子的人白细胞抗原A201阳性表位多肽，即SEQ ID NO.1‑6中三项以上所示的氨基酸序列组成的多肽，负载树突状细胞，可引发特异性的靶向抗肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞反应；所述树突状细胞通过以下方法获取：通过血细胞分离机单采肿瘤患者2‑4升外周血并经淋巴细胞分离液纯化得到单个核细胞；细胞计数仪计数后单个核细胞用AIM‑V培养基稀释到3‑5×10⁶，加入75cm²培养瓶中贴壁；在37℃、5％CO₂培养箱中孵育90min后，未贴壁细胞洗涤收集下来，用于激活毒性T淋巴细胞之用；贴壁细胞加入完全AIM‑V培养基诱导培养，含有5％的自体血清、1000IU/mL重组人粒细胞巨噬集落刺激因子和500IU/mL重组人干扰素α；培养到第四天收获未成熟树突状细胞(DCs)；成熟DCs采用完全AIM‑V培养基再诱导到第五天得到，含5％的自体血清、1000IU/mL重组人粒细胞巨噬集落刺激因子和500IU/mL重组人干扰素α。