一种哺乳动物基因组修饰方法

摘要

一种哺乳动物基因组修饰方法，属于基因工程技术领域。本发明根据研究目的选定哺乳动物基因组上特定区域的靶基因DNA序列，设计识别靶基因DNA序列的一对单链DNA寡核苷酸然后与本发明构建的质粒载体pcDNA‑DN按照质量比1‑2:1‑2:5‑20的比例共转染哺乳动物细胞，48小时后提取基因组DNA，PCR扩增并克隆测序，检测靶标区域序列的突变比例。与现有技术相比，本发明通过合成一对短链向导DNA引导核酸酶X在细胞或个体水平上对哺乳动物特定基因进行切割以达到敲除或修饰某一基因的目的，从而解析基因的功能、构建基因突变库。有益效果在于，向导DNA的总长度为40nt以上，极大增加了基因组修饰的特异性。

主权项

一种哺乳动物基因组修饰方法，其特征在于包括如下步骤：1)根据研究目的选定哺乳动物基因组上特定区域的靶基因DNA序列；2)设计识别靶基因DNA序列的一对单链DNA寡核苷酸，这一对单链DNA寡核苷酸除3'末端的一个碱基外分别与靶基因DNA不同区段的正义链和反义链互补；3)步骤2)中所述的一对单链DNA寡核苷酸与质粒载体pcDNA‑DN按照质量比1‑2:1‑2:5‑20共转染哺乳动物细胞，所述pcDNA‑DN序列如SEQ ID NO.2所示。