小球藻功能成分CPE的高通量筛选系统、筛选方法及其制备方法

摘要

本发明涉及一种小球藻功能成分CPE的高通量筛选系统、筛选方法及其制备方法。筛选平台包括：1)抗氧化测试：2)细胞免疫调节测试：3)氧化还原金属离子螯合测试：4)抑制糖基化终产物AGEs测试。制备方法包括：将蛋白核小球藻藻粉加入蒸馏水中，高压下，110-130℃加热30-60min，进行萃取；取出样品，室温下冷却后，10000rpm离心30min，上清液经减压抽滤后，4℃保存备用；将离心后的藻泥，加入等量蒸馏水重悬，重复上述操作，合并两次滤液，冷冻干燥，制得小球藻CPE提取物粉末。经本发明方法提取的小球藻功能成分CPE得率高，且提取物中的核酸和蛋白质含量丰富，适宜于工业化生产，以降低微藻能源的开发成本，提高微藻能源的综合利用度。

主权项

一种小球藻功能成分CPE的高通量筛选系统，包括：1)抗氧化测试：采用Griess试剂进行测试，通过分光光度法检测样品的总抗氧化能力和对自由基的清除作用；2)细胞免疫调节测试：a.四噻唑蓝MTT法检测组分对小鼠巨噬细胞Ana‑1存活率的影响；b.中性红NR染色法检测组分对Ana‑1吞噬功能的影响；c.荧光探针法检测样品对Ana‑1细胞内NO分泌的改变；3)氧化还原金属离子螯合测试：a.采用菲洛嗪作为Fe²⁺螯合试剂，通过分光光度法检测样品的Fe²⁺螯合能力；b.采用邻苯二酚紫作为Cu²⁺螯合试剂，通过分光光度法检测样品的Cu²⁺螯合能力；4)抑制糖基化终产物AGEs测试：非酶糖基化反应体系：将10mg/mL的牛血清白蛋白BSA和0.5mol/L的葡萄糖溶解于0.02mol/L、pH 7.4的磷酸缓冲液PBS中，得非酶糖基化反应体系；通过荧光光谱法，分析样品在美拉德反应的不同阶段对AGEs和pentosidine的影响。