基于多重PCR的二代测序建库技术

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别涉及二代测序文库构建技术。该方案中利用两轮多重PCR来建库。针对每个靶标区域或者靶标位点，设计两条特异性引物，上游的引物OP用于第一轮多重PCR，下游的引物IP用于第二轮多重PCR。将第二轮PCR产物纯化后，进行Q‑PCR定量，稀释到合适的浓度用于二代测序。本发明能够有效的缩短Ampliseq试剂盒存在的问题，对于客户定制化的panel设计生产周期只需要两周，并降低单个样本建库的成本，且Ion Torrent和Illumina测序平台都通用。

主权项

二代测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将样本DNA进行片段化处理，随后每个片段两端加上特殊的接头；步骤2，加入第一轮扩增的上游引物混合池，与特殊接头互补的通用引物配制成PCR总体系，进行第一轮扩增；步骤3，将第一轮PCR产物纯化后，加入第二轮扩增的下游引物混合池，与第二步中使用过的特殊接头互补的通用引物配制成PCR总体系，进行第二轮扩增；步骤4，将第二轮PCR产物纯化后，配制反应总体系，进行Q‑PCR定量，稀释到合适的浓度，即可用于二代测序。