一株过表达lae1基因的木霉工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明涉及一株过表达lae1基因的木霉工程菌及其构建方法与应用。构建方法包括如下步骤：(1)从木霉SMF2提取基因组DNA，经PCR扩增，制得lae1基因ORF区及终止子序列；(2)将lae1基因ORF区及终止子序列经酶切后，与同样酶切的载体连接，制得重组质粒；(3)将重组质粒转化感受态细胞，制得过表达质粒；(4)将过表达质粒经酶切线性化，然后转化原生质体，制得过表达lae1基因的木霉工程菌。本发明构建的过表达lae1基因的木霉工程菌能够显著提高木霉peptaibols的产量，有助于木霉peptaibols在医药和农业上的应用。

主权项

一株过表达lae1基因的木霉工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从木霉SMF2提取基因组DNA，然后以制得的基因组DNA为模板进行PCR扩增，制得lae1基因ORF区及终止子序列；所述lae1基因ORF区及终止子序列的PCR特异引物序列如下：lae1OE‑F：CATGccatggCCTCTCGAAACGCTCCCAAC；lae1OE‑R：CCCaagcttCTAGCTAACCTGTTGCTGTAC；(2)将步骤(1)制得的lae1基因ORF区及终止子序列经NcoI和HindIII双酶切后，与同样经NcoI和HindIII双酶切的载体pIG‑1783进行连接，制得重组质粒；(3)将步骤(2)制得的重组质粒转化E.coliDH5α感受态细胞，经含氨苄青霉素Amp的LB培养基筛选，提取重组表达载体，制得过表达质粒pIG1783‑lae1OE；(4)将步骤(3)制得的过表达质粒pIG1783‑lae1OE经HindIII酶切线性化，然后转化原生质体，经再生、初筛、复筛，制得过表达lae1基因的木霉工程菌。