具染料协同降解作用的毛栓孔菌漆酶的培养制备法及用途

摘要

本发明公开了一种具染料协同降解作用的毛栓孔菌漆酶的培养制备法，包括如下步骤：将活化后的毛栓孔菌Trametes hirsuta MX2放入发酵培养基中培养，所得的发酵液离心，离心后所得上清液为粗酶液；将粗酶液分离纯化，得到两种漆酶同工酶，分别记为ThLac1和ThLac2。本发明还同时提供了利用上述毛栓孔菌漆酶进行的染料脱色法：将ThLac1与ThLac2混合，ThLac1占混合酶总酶活的50～80％，将混合酶放入染料中直至含量为50IU/L后进行脱色；脱色时间为≥3小时。

主权项

具染料协同降解作用的毛栓孔菌漆酶的培养制备法，其特征是包括如下步骤：1)、毛栓孔菌Trametes hirsuta MX2在固体培养基上于28±0.5℃恒温培养7±1天，从而实现活化；将活化后的毛栓孔菌放入发酵培养基中，于150±10r/min、28±0.5℃下恒温振荡培养13±1天，所得的发酵液离心，离心后所得上清液为粗酶液；2)、将上述粗酶液分离纯化，得到两种漆酶同工酶，分别记为ThLac1和ThLac2；所述分离纯化包括超滤浓缩、硫酸铵沉淀透析、离子交换层析和凝胶层析；①、所述超滤浓缩为：将所述粗酶液放入滤膜孔径为10kDa的超滤管中，离心，得超滤液；②、所述硫酸铵沉淀透析为：在超滤液中加入硫酸铵，使溶液中硫酸铵的质量浓度达到80±2％，4℃过夜，离心，将沉淀用少量0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.8)溶解，得酶液；将酶液装入孔径为12～14kDa的透析袋中，用50±5体积倍于酶液的0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.8)透析24±1h，透析过程中更换相同体积量的醋酸钠缓冲液2～4次；得透析液；③、所述离子交换层析为：将上述透析液上层析柱，所述层析柱为DEAE‑Sepharose FF层析柱；用0～0.5mol/L NaCl溶液和0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.8)进行洗脱，流速0.8mL/min，将具有相同活性的组分进行合并；收集由5.8％体积含量的NaCl溶液和94.2％体积含量的醋酸钠缓冲液组成的洗脱液对应的所得物，超滤浓缩，得ThLac1离子交换液；收集由13.3％体积含量的NaCl溶液和86.7％体积含量的醋酸钠缓冲液组成的洗脱液对应的所得物，超滤浓缩，得ThLac2离子交换液；④、所述凝胶层析为：将ThLac1离子交换液、ThLac2离子交换液分别进行以下操作：将其加入层析柱，所述层析柱为Sephacryl S‑200层析柱；用0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.8)以0.15mL/min的流速洗脱，将有活性的组分合并后超滤浓缩；ThLac1离子交换液对应所得的为纯化漆酶ThLac1；ThLac2离子交换液对应所得的为纯化漆酶ThLac2。