重组干扰素α1的产业化制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种重组猪干扰素α1(rpIFNα1)的大肠杆菌表达、包涵体变复性及纯化的产业化生产方法。具体涉及到：1、rpIFNα1大肠杆菌表达菌株的构建；2、rpIFNα1高密度发酵工艺开发；3、rpIFNα1包涵体变性和复性工艺开发；4、复性后rpIFNα1样品的纯化制备。通过以上4个层面的技术攻关，本发明方法生产的rpIFNα1具有较高的生物活性，且该方法产量高、成本低廉、易于放大。

主权项

重组猪干扰素α1的制备方法，为重组猪干扰素α1大肠杆菌的高密度发酵表达，包括发酵种子活化、发酵一级种子液制备、发酵二级种子液制备、高密度发酵；所述的高密度发酵包括如下步骤：将二级种子液按照5‑15％的接种量接入到含灭菌后的分批发酵培养基发酵罐中；设定发酵温度为37℃、pH为6.8‑7.2之间、DO设定在30‑40％之间；发酵开始后定期取样进行OD600和菌体湿重的测定，待DO曲线出现急剧上升的时候表明分批培养基中葡萄糖耗尽，开始加入补料培养基进行补料培养；待菌体生长至0D600≈45‑55之间向发酵罐中加入终浓度为0.5‑1.0mM/L的IPTG进行诱导表达；37℃诱导表达4‑6h结束培养。