基于纳米孔膜‑磁性纳米颗粒的电化学组胺传感器的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于纳米孔膜/磁性纳米颗粒的电化学组胺传感器的制备方法。本发明利用氧化铝纳米多孔膜为核心传感芯片，使用3‑(2,3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(GPMS)处理氧化铝纳米多孔膜，直接固定组胺抗体，再用质量浓度为1％牛血清蛋白的PBS缓冲液封闭。表面羧基化Fe₃O₄磁性纳米颗粒通过EDC/NHS固定抗体，富集样品中组胺到经生物功能化处理的氧化铝纳米多孔膜内，阻塞纳米孔，利用电化学阻抗分析方法对其进行检测。本发明可实现组胺的快速检测，传感器检测灵敏度高，检测下限低，特异性强。

主权项

一种基于纳米孔膜‑磁性纳米颗粒的电化学组胺传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括：(1)制备以氧化铝纳米孔膜为核心传感芯片的电化学组胺传感器：将氧化铝纳米多孔膜在沸腾双氧水中处理30‑40分钟后，先用去离子水清洗烘干，再用3‑(2,3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷进行硅烷化处理，最后用环氧树脂胶封在PDMS容器的上下腔之间，制得以纳米孔膜为核心芯片的电化学组胺传感器；(2)固定组胺抗体：往步骤(1)电化学组胺传感器中加入组胺单克隆抗体溶液，0～4℃下静置3～6小时后，往芯片上腔通入PBS缓冲液，清洗1～3次，再用含牛血清蛋白的PBS缓冲液封闭纳米孔膜，所得传感器于4℃保存备用；(3)表面羧基化Fe₃O₄磁性纳米颗粒固定组胺抗体：表面羧基化Fe₃O₄磁性纳米颗粒，先用EDC/NHS活化羧基，再将磁性纳米颗粒分散到PBS缓冲液中，加入组胺抗体，充分混合，0～4℃静置6～10小时后，在磁场作用下分离得到组胺抗体修饰的磁性纳米颗粒，分散到PBS缓冲液中，4℃下保存备用；(4)利用磁性纳米颗粒富集组胺到纳米多孔膜上：将步骤(3)得到的Fe₃O₄磁性纳米颗粒加入到待测试样品中，20‑40分钟后，在磁场作用下分离出磁性纳米颗粒并加入到步骤(2)得到的传感器芯片上，静置15～30分钟后，加入PBS缓冲液洗去纳米孔膜表面非特异性结合的磁性纳米颗粒，得到基于纳米孔膜‑磁性纳米颗粒的电化学组胺传感器。