具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法，其方法包括(1)枸杞多糖的提取粗制；(2)枸杞多糖的脱色脱蛋白；(3)枸杞多糖的分离纯化；(4)枸杞多糖的酶解和(5)枸杞多糖的再分离纯化。本发明通过大量实验筛选出最佳的枸杞精制多糖的制备工艺，整个工艺设计合理，可操作性强，制备得到的枸杞多糖经过ABTS法测抗氧化、羟基自由基清除率测定、DPPH自由基清除活性等测验表明，本发明制备得到的枸杞精制多糖具有很好的抗氧化活性，尤其对羟基自由基清除有显著效果。

主权项

一种具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)枸杞精制多糖的提取粗制：取枸杞加无水乙醇回流进行脱脂，过滤，取脱脂后滤渣，加入超纯水回流提取，取回流提取液，浓缩，浓缩液加乙醇，静置过夜；分离得沉淀物，干燥，得粗多糖；(2)枸杞精制多糖的脱色脱蛋白：取步骤(1)制备好的粗多糖，加入体积比为1：1的丙酮‑石油醚混合液，在55～65℃回流脱色1～2h，然后过滤得沉淀，烘干，得到脱色的枸杞粗多糖；取脱色的枸杞粗多糖，加水稀释成糖液置于分液漏斗中，加入三氯甲烷和正丁醇混合溶液，反复震摇，然后离心收集上层糖液；重复操作以上步骤直至分液漏斗下层无明显沉淀析出，然后烘干得脱色脱蛋白枸杞精制多糖；(3)枸杞精制多糖的分离纯化：取步骤(2)脱色脱蛋白枸杞精制多糖溶于蒸馏水中，加样于Cellulose DE－52色谱柱中，先后依次用蒸馏水、0.25mol/L NaCl、2mol/L NaCl和蒸馏水洗脱，流速为1～2mL/min，分步收集洗脱液，将收集的洗脱液浓缩后置于透析袋中，放置冰箱里透析，然后取透析袋中多糖，浓缩，冻干，保存；(4)枸杞精制多糖的酶解：取步骤(3)得到的多糖，加入α‑淀粉酶，加热酶解，得到酶解多糖；(5)枸杞精制多糖的再分离纯化：取步骤(4)得到的酶解多糖，上样于Sephadex G－100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，分段收集洗脱液，并用苯酚‑硫酸法跟踪检测每份洗脱液的糖含量，用酶标仪检测595nm处吸收值，最后根据吸收值绘制总洗脱曲线，收集合并多糖洗脱液，浓缩，冻干，得具有抗氧化活性的枸杞精制多糖。