一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种和栽培种远缘杂交后代的方法

摘要

本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种和栽培种远缘杂交后代的方法，具体包括如下步骤：母本选用芝麻栽培品种(2n＝26)，父本选用芝麻野生种(2n＝64)；父母本进行远缘杂交，取杂交授粉后10～18天的幼蒴，剥取胚珠；将胚珠接种到幼胚诱导培养基中，培养诱导胚芽萌发得到幼胚；再将幼胚接种到分化培养基中，培养直至幼胚发育成杂种F₁幼苗；杂种F₁幼苗经增殖扩培后得到完整的杂种F₁植株。本发明利用幼胚挽救技术克服了芝麻野生种与芝麻栽培种远缘杂交时容易发生幼胚败育而无法获得杂种F₁植株的问题，将野生种的抗病抗逆特性转入栽培种，可以有效改良芝麻栽培品种的种质。

主权项

一种利用幼胚挽救技术获得芝麻野生种与栽培种远缘杂交后代的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）亲本材料准备：母本选用 2n=26 的芝麻栽培品种，父本选用 2n=64 的芝麻野生种（S.radiatum），精选无病饱满的父母本籽粒以备种植；（2）远缘杂交：当父母本均开花时，摘掉母本露白的花冠和雄蕊，用父本授粉杂交；（3）胚珠的剥取：取步骤（2）杂交授粉后生长发育了10~18天的幼蒴，用清水将幼蒴表面冲洗干净，然后在超净工作台上对幼蒴表面进行消毒并用无菌水漂洗，最后在无菌条件下切开幼蒴，轻轻剥出胚珠；（4）幼胚挽救离体诱导培养：在无菌条件下，将步骤（3）得到的胚珠接种到幼胚诱导培养基中，在温度28~30℃、光周期8~16h/d、光照强度1500~2000 lux条件下离体诱导培养，胚珠萌发得到幼胚；所述幼胚诱导培养基为：在MS基本培养基中添加0.3~0.5mg/L 赤霉素、0.5~1 mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤、30g/L蔗糖和8g/L琼脂，培养基的pH值为5.8；（5）幼胚的分化培养：将步骤（4）得到的幼胚接种到分化培养基中，在温度28~30℃、光周期8~16h/d、光照强度1500~2000 lux条件下分化培养直至幼胚发育成杂种F₁幼苗；（6）杂种F₁植株的获得、繁殖与保存：在无菌条件下，从培养基中取出杂种F₁幼苗，把幼苗切成2‑3 段，每段至少保留一片叶子，将幼苗顶芽区段置于生根培养基中培养直至形成完整的杂种F₁植株后放在人工气候培养箱中保存；将幼苗除顶芽外的其它区段置于增殖培养基中进行扩繁，直至诱导分化出顶芽后，再将顶芽接种到生根培养基中培养直至形成完整的杂种F₁植株并保存。