诊断用己糖激酶的制备方法

摘要

本发明属于酶制剂的生产，特别是指一种诊断用己糖激酶的制备方法。包括菌种的纯化及复壮、发酵制备含有己糖激酶的发酵液、对发酵制备的己糖激酶粗酶液进行纯化等工艺步骤，本发明解决了目前国内尚无自主知识产权的诊断用己糖激酶出售、进口酶制剂价格偏高且使用不便等问题，具有菌种来源及制备方法可行且适于工业化生产、填补了国内尚无自主知识产权诊断用己糖激酶产品的空白、所制备的产品主要性能指标高于进口产品等优点。

主权项

诊断用己糖激酶的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：A、菌种的纯化及复壮A₁、将酿酒酵母溶于无菌水后划线于孟加拉红培养基上，于30‑35℃恒温培养2‑3天，选取长势良好的单菌落划线培养，于32‑37℃继续培养，挑取长势良好的菌株发酵并进行酶活力检测，最终选取酶活较高的菌株作为后续发酵用菌株；将筛选出的酿酒酵母单菌落接种于灭菌后的试管培养基中，在温度为28‑30℃条件下培养12‑16小时，试管培养基采用如下质量百分含量的原料组成：蛋白胨1％‑3％；酵母粉0.5％‑1.5％；葡萄糖1％‑3％；余量为水；pH＝6.5‑7.5；酿酒酵母为安琪酵母股份有限公司生产，产品标准代码为GB/T20886；A₂、纯化及复壮后菌种的保藏按质量比为1：1‑3的比例，将步骤A₁培养后的菌种置于质量百分含量为30％‑50％的无菌甘油溶液中于‑20℃保藏；B、发酵制备含有己糖激酶的发酵液将步骤A₂中保藏的菌种活化后接种于灭菌后的发酵培养基中，在温度为28℃‑30℃、压力为0.03MPa‑0.05MPa、搅拌转速为150rpm‑200rpm的条件下发酵制成含有己糖激酶的发酵液；发酵培养基采用如下质量百分含量的原料组成：蛋白胨1％‑3％；酵母粉0.5％‑1.5％；葡萄糖1％‑3％，余量为水；pH＝6.5‑7.5；C、对发酵液进行后处理制备己糖激酶粗酶液；D、对己糖激酶粗酶液进行纯化。