一种以叶肉原生质体为受体的杂交鹅掌楸高效的瞬间基因表达方法

摘要

本发明公开了一种以叶肉原生质体为受体的杂交鹅掌楸高效的瞬间基因表达方法，包括：杂交鹅掌楸叶肉原生质体的制备、质粒的准备、转化和观察。本发明以杂交鹅掌楸叶肉细胞的原生质体做为遗传转化的受体系统，通过PEG介导的方法，以绿色荧光蛋白GFP基因作为报告基因，通过荧光显微镜检测到GFP基因高效的瞬间表达。本发明采用杂交鹅掌楸叶片作为原生质体的来源，取材方便，活力强，建立的瞬间表达体系可为鹅掌楸及木兰科植物基因功能的研究提供一个快速方便的操作平台。

主权项

一种以叶肉原生质体为受体的杂交鹅掌楸高效的瞬间基因表达方法，其特征在于，包括以下步骤：1）使用QIAGEN Plasmid Midi Kits抽提纯化质粒，将其调整到2 μg/μL的浓度后，‑20℃保存备用；2）杂交鹅掌楸叶肉细胞原生质体的分离纯化，获得浓度为10⁵/mL的原生质体；3）取质粒于2 mL离心管中，然后加入原生质体，用手轻轻的将质粒DNA及原生质体溶液混匀；缓慢加入40% PEG‑4000溶液，轻柔混匀，放置15 min；加入W5溶液，轻柔混匀；1100 rpm离心2 min后弃上清，加入WI溶液轻轻悬浮原生质体，并转移到细胞培养板上；4）将细胞培养板放在23℃黑暗静置培养18 h后，置于荧光显微镜下观察。