一种猪瘟病毒抗体竞争化学发光定量检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种猪瘟病毒抗体竞争化学发光定量检测试剂盒，该试剂盒包括包被抗原包被板、酶标抗体、校准品、浓缩洗涤液、发光底物A、发光底物B；所述抗原包被板，将纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被抗原；酶标抗体为酶标抗体由辣根过氧化物酶标记的猪瘟病毒单克隆抗体；所述校准品，将活疫苗免疫的高免血清采用校准品稀释液分别稀释到浓度为0 NU/mL、2NU/mL、5 NU/mL、10 NU/mL、30 NU/mL和60NU/mL；所述发光底物A中含有鲁米诺，羟基香豆素、没食子酸和Tris‑Hcl缓冲液；本发明试剂盒具有检测时间短，检测信号大大增强，灵敏度高等优点。

主权项

一种猪瘟病毒抗体竞争化学发光定量检测试剂盒，包括抗原包被板、酶标抗体、校准品、浓缩洗涤液、发光底物A和发光底物B，其特征在于：所述抗原包被板，将纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被抗原，使用PH9.6的碳酸盐缓冲液将猪瘟病毒E2蛋白包被在不透明聚苯乙烯板上；所述酶标抗体为酶标抗体由辣根过氧化物酶标记的猪瘟病毒单克隆抗体；采用戊二醛方法进行标记，即将猪瘟病毒单克隆抗体、戊二醛和辣根过氧化物酶加入容器中进行交联，所得混合物，进行透析除去过量的戊二醛；在透析后的混合物中，加入等体积的甘油，置于‑20℃保存；所述校准品，将活疫苗免疫的高免血清采用校准品稀释液分别稀释到浓度为0 NU/mL、2NU/mL、5 NU/mL、10 NU/mL、30 NU/mL和60NU/mL；所述剂量单位NU/mL的建立方法为，根据血清的细胞中和试验结果，挑选效价分别为全阴血清、1:2、1:20、1:80、1:960、1:2560的血清，建立起和中和试验血清效价相对应的线性关系，并且建立起和中和试验血清效价分别为全阴血清、1:2、1:20、1:80、1:960、1:2560相对应的校准品，校准品分别为0、2、5、10、30、60，并且建立剂量单位NU/ml；所述浓缩洗涤液，为含有0.05%的Tween‑20的PBS缓冲液，使用时采用蒸馏水进行稀释；所述发光底物A中含有鲁米诺0.15mmol/L，羟基香豆素0.59mmol/L、没食子酸0.35mmol/L和Tris‑Hcl缓冲液0.2mol/L，余量为水；所述发光底物B中含有氨基酸氧化酶0.85mmol/L，吐温‑20 体积浓度为.8%， DTPA 0.5mmol/L、维生素C 0.12mmol/L和乙酸‑乙酸盐缓冲液0.2mol/L，余量为水。