一种测定甘蔗中不同形式植物甾醇含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定甘蔗中不同形式植物甾醇含量的方法，该方法将甘蔗样品中植物甾醇进行酸式水解和碱式皂化后，将酯态甾醇、配糖类甾醇和酰基配糖类甾醇转化为游离态植物甾醇，萃取并配合现有的植物甾醇提取方法分别获得含对应游离态甾醇的提取物，通过高效液相色谱技术获得上述提取物的含量，并计算得到甘蔗样品中不同形式植物甾醇的含量。本发明方法选择盐酸‑乙醇溶液和氢氧化钾‑乙醇溶液的酸碱组合形式，确定适宜的反应条件，选择6‑酮胆甾烷醇作为内标，乙醚作为萃取剂，并配合优化的高效液相色谱条件，显著提高了提取效率和检测的准确性。

主权项

一种测定甘蔗中不同形式植物甾醇含量的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将红甘蔗的皮30℃干燥18h后直到质量不在发生变化，粉碎，过筛，获得60目的甘蔗粉末；取1g的甘蔗粉末加入到10mL的乙醇中进行浸提，再加入120μg 6‑酮胆甾烷醇作为内标，30℃下，130次/min振荡浸提液4h，过滤，收集滤液，蒸干后，溶解在10mL的甲醇中，用0.45μm滤膜过滤，获得含游离态甾醇的第一提取物；(2)将红甘蔗的皮30℃干燥18h后直到质量不在发生变化，粉碎，过筛，获得60目的甘蔗粉末；取0.5g的甘蔗粉末加入到5mL 4.0mol/L的KOH乙醇溶液中进行皂化，再加入120μg 6‑酮胆甾烷醇作为内标，70℃回流皂化1h后，用10mL乙醚提取两次，收集乙醚层，并用蒸馏水洗至中性，用无水NaSO₄除水，蒸干后溶解在25mL甲醇中，用0.45μm滤膜过滤，获得含游离态甾醇和酯态甾醇的第二提取物；(3)将红甘蔗的皮30℃干燥18h后直到质量不在发生变化，粉碎，过筛，获得60目的甘蔗粉末；取0.5g的甘蔗粉末加入到5mL 4.0mol/L的HCl乙醇溶液中进行酸水解，酸用量为40×10^‑3mol/g，再加入120μg 6‑酮胆甾烷醇作为内标，70℃酸水解1h后，冷却至室温，加入10mL4.0mol/L KOH乙醇溶液，碱用量为80×10^‑3mol/g，70℃回流皂化1h后，用10mL乙醚提取两次，收集乙醚层，并用蒸馏水洗至中性，用无水NaSO₄除水，蒸干后溶解在25mL甲醇中，用0.45μm滤膜过滤，获得含游离态甾醇、酯态甾醇、配糖类甾醇和酰基配糖类甾醇的第三提取物；(4)利用高效液相色谱技术测定步骤(1)～(3)中提取物的含量，高效液相色谱的具体条件为：选用LC‑2010型号的色谱仪，色谱柱采用250mm×4.6mm的Luan 5μmC18色谱柱；采用等度洗脱方式，流动相为甲醇:乙腈＝4:1，流速为1.2mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，待基线稳定后，进样20μl；绘制标准曲线，再通过标准曲线得到上述第一、二、三提取物的含量，第一提取物的含量为游离态甾醇的含量，第二提取物与第一提取物的差值为酯态甾醇的含量，第三提取物与第二提取物的差值为配糖类甾醇和酰基配糖类甾醇的总含量。