主权项 |
一种多级细胞筛选培养芯片的使用方法,多级细胞筛选培养芯片由芯片(1)和分选层级系统单元(7)组成,它是在方形或圆形的芯片(1)上加工有一个总进口(9),总进口(9)连通着2个单元分管(10),每一个单元分管(10)再连接一个单元进样口(8),每一个单元进样口(8)通过单元进样管(13)连接一个分选层级系统单元(7),分选层级系统单元(7)有4个分选层级,每层都有4个圆盘形的分选和培养细胞的分选单位(18);分选层级系统单元(7)的第一层分选单元(6)的4个分选单位(18),通过第一层分配支管(12)接通单元进样管(13),第一层分配支管(12)有分出的四个支管连接第一层分选单元(6)的4个分选单位(18);第一层分选单元(6)的4个分选单位(18)的出口管两两成对,汇流到2根第一层汇流管(14),2根第一层汇流管(14)再汇成一个出口到第二层分配支管(11);第二层分配支管(11)分出四个支管连接第二层分选单元(5)的4个分选单位(18),第二层分选单元(5)的4个分选单位(18)的出口管两两成对,汇流到2根第二层汇流管(15);每根第二层汇流管(15)各自独立地分出支管,与第三层分选单元(4)的2个分选单位(18)连接,形成第三层分选单元(4)的4个分选单位(18)两两成对;第三层分选单元(4)两两成对的分选单位(18)出口管汇流到2根第三层汇流管(16),每根第三层汇流管(16)同样各自独立地分出支管,与第四层分选单元(3)的2个分选单位(18)连接,形成第四层分选单元(3)的4个分选单位(18)两两成对;第四层分选单元(3)两两成对的分选单位(18)出口管汇流到2根排样管(17),排样管(17)一端加工有出口(2);所述分选单位(18)统一加工有尺寸一致、相互盘绕成Ø8mm或Ø10mm圆形的,两个U字形的培养细胞用的培养池,相对应的,在两个培养池之间,加工有截面尺寸100μm×100μm的一条筛选通道;每个分选单位(18)的圆盘形的培养池,在各自培养池的圆盘中心和靠圆盘外边处,都加工有培养池进出口;每个筛选通道的两侧,加工有双侧宽度尺寸一致的筛选细胞的筛选孔,筛选孔与两个培养池连通;筛选孔尺寸在5μm‑ 90μm之间,每一层级分选单元的4个分选单位(18)的筛选孔尺寸相等;分选层级系统单元(7)的各个层级的筛选孔尺寸一致相同,或从层级小到大,各个层级的筛选孔尺寸相等和不相等相互交替,且筛选孔尺寸由小变大;其特征在于使用方法如下:第一步,按一定流速,将含有一定浓度的活细胞的液体样本,从总进口(9)输入到单元分管(10)中,样品流经单元进样口(8)、单元进样管(13)、各层分配支管和各层汇流管、排样管(17)、最后从出口(2)流出;用废液瓶收集,一直到样品筛选完;在各个分选单位(18)的培养池内,培养和进行活细胞的对比实验;或者,将总进口(9)堵住,按一定流速,将4个含有一定浓度的活细胞的液体样本,分别各自一一对应从4个单元进样口(8),输入到单元进样管(13)中,样品流经各层分配支管和各层汇流管、排样管(17)、最后从出口(2)流出;用废液瓶收集,一直到样品筛选完,在各个分选单位(18)的培养池内,培养和进行活细胞的对比实验研究;第二步,待细胞贴壁后,通过培养池进出口,将培养基溶液通入培养池内,进行换液,然后将芯片置于细胞培养箱中,保持5%的二氧化碳气体含量,37℃恒温;第三步,加试剂操作,通过培养池进出口加入实验所需的钙离子试剂,并利用培养池进出口,多次吸打溶液,混合均匀所加的试剂;最后将芯片置于细胞培养箱中,并一直保持5%的二氧化碳气体含量,37℃恒温。 |