一种家兔魏氏梭菌病的A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及动物细菌学领域，提供了一种家兔魏氏梭菌病的A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的制备方法，该方法以A型产气荚膜梭菌为原始菌种，经过一级和二级培养后最终获得菌液，将该菌液与白油佐剂混合即制得A型产气荚膜梭菌灭活疫苗；本发明所述方法制备的疫苗免疫家兔，攻毒后其保护率达到100％，起到了良好的免疫保护作用。

主权项

一种家兔魏氏梭菌病的A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的制备方法，具体步骤如下：(1).生产用菌种的制备将产气荚膜梭菌标准菌种A型NCTC528接种于血琼脂平板，37℃在厌氧箱中培养36h复苏；挑取典型菌落接种于7ml营养肉汤培养基上39℃厌氧培养12h作为一级种子培养液；之后将2ml的一级种子培养液接种于100ml营养肉汤培养基中39℃厌氧培养12h作为二级种子培养液；(2).制苗用菌液的制备将70ml上述获得的二级种子培养液接入1L产毒培养基中，45℃厌氧环境下200r/min搅拌培养4h；(3).制苗用菌液的灭活将上述培养后获得的菌液用1MNaOH调pH至7.2，然后加入甲醛溶液使甲醛最终质量分数达到0.3％进行灭活，充分搅拌混匀，37℃灭活3天；(4).疫苗的制备灭活检验合格的菌液与灭菌的白油佐剂按体积比1：2的比例充分乳化，并按照每100毫升体积的疫苗加入0.01克硫柳汞的比例加入的硫柳汞即可获得目标灭活疫苗；其中所述的产毒培养基通过如下方法获得：将0.29g Na₂HPO₄.12H₂O，6.02gKH₂PO₄，8.0gNaCl，20g蛋白胨，10g糊精，20g酵母提取物，12gL‑精氨酸按顺序加入到1000ml去离子水即得。