一种用胶体金层析技术检测肺炎支原体核酸的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种用胶体金层析技术检测肺炎支原体核酸的方法及试剂盒，属于医学生物技术领域。本发明中将核酸探针直接标记上胶体金颗粒，且标记的核酸探针序列设计为通用序列，也可以用于其他病原体的检测；本发明在设计时引入的特异探针A和特异探针B有桥分子成分的作用，两种探针成功的将金标探针和MP核酸扩增片段串联结合到一块，实现MP核酸片段的特异检测；其中每套探针都可以设计两条以上，这样的设计又有利于提高试纸条的灵敏度；结合MP的依赖核酸序列的扩增技术和扩增后产物的胶体金标记检测的优点，对实验人员技术要求低，更无需特殊的仪器设备，易于MP核酸检测向基层及偏远农村医疗机构的推广。

主权项

一种肺炎支原体的胶体金标检测试剂盒，包括：（1）胶体金试纸条：所用试纸条被固定于PVC底板上，从左往右依次是样品垫、玻璃纤维、NC膜、吸水纸；NC膜上有检测线T线和质控线C线，通用探针1的5’端巯基化修饰后标记胶体金颗粒，序列如Seq ID No.1所示，且可以和特异探针A系列互补配对杂交，将标记胶体金后的通用探针1固定于试纸条的玻璃纤维素膜上；所述检测线处包被链霉亲和素，质控线包被抗地高辛抗体；（2）、分别盛有通用探针2、特异探针A系列、特异探针B系列的探针管：所述通用探针2标记有生物素，且和特异探针B系列互补配对杂交，序列如Seq ID No.6所示；特异探针A系列A1、A2，标记有地高辛，其一端和肺炎支原体特异扩增产物杂交，另一端和通用探针1杂交，序列分别如Seq ID No.2、Seq ID No.3所示；特异探针B系列B1、B2，一端和肺炎支原体特异扩增产物杂交，另一端和通用探针2杂交，序列分别如Seq ID No.4、Seq ID No.5所示；特异探针A系列A1、A2分别和支原体特异扩增产物的不同区域互补配对杂交，装在不同的探针管里；特异探针B系列B1、B2分别和支原体特异扩增产物的不同区域互补配对杂交，分别装在不同的探针管里；（3）、盛装着对肺炎支原体的表面黏附素P1蛋白一段保守序列特异性的引物的引物管，所述R引物序列如Seq ID No.7所示，F引物序列如Seq ID No.8所示；（4）、盛装着三种酶混合物的管：逆转录酶、T7 RNA聚合酶和RnaseH。