用于电泳中免染蛋白质检测的改良电极缓冲液

摘要

通过将卤代有机化合物纳入凝胶两端的一种或两种电极缓冲溶液，使凝胶中电泳分离的蛋白质衍生以产生荧光发射。所用的卤代化合物在缓冲溶液和凝胶的pH下带电荷，并且所述化合物上所带电荷的极性使得所述化合物在电泳影响下从电极缓冲液迁移进入所述凝胶，该过程与蛋白质迁移进入凝胶的过程同时进行。一旦蛋白质分离并分布在凝胶中，并且所述凝胶被卤代化合物完全渗透，即可用紫外光辐照该凝胶以诱导卤代化合物和蛋白质通过所述蛋白质上的色氨酸残基发生反应，产生荧光反应产物。

主权项

一种通过沿凝胶的第一末端和第二末端之间的线性维度进行凝胶内电泳来分离生物样品中所包含的蛋白质并且检测如此分离的所述蛋白质的方法，所述方法包括：(a)将所述样品加载到所述凝胶上，并通过电极缓冲液使所述凝胶的所述第一和第二末端与浸没于所述电极缓冲液中的电极电连接，其中至少一种所述电极缓冲液中悬浮有卤代有机化合物，用紫外光辐照后，该卤代有机化合物与色氨酸残基发生反应以形成荧光化合物，所述卤代有机化合物带有电荷，(b)供能于所述电极以形成相反极性，选择所述极性的方向以使所述蛋白质沿所述线性维度在所述凝胶内分布并且使所述卤代有机化合物从所述电极缓冲液迁移进入所述凝胶，和(c)在所述蛋白质如此分布且所述卤代有机化合物已经如此迁移进入所述凝胶的情况下，用紫外光辐照所述凝胶以使所述蛋白质上的色氨酸残基与所述卤代有机化合物反应，以形成所述蛋白质的荧光衍生物，并且检测由所述荧光衍生物发出的荧光信号。